
LLC-MK2细胞(恒河猴肾细胞)
- 来源:肾
- 细胞特征:贴壁细胞 , 上皮细胞样
- 培养基:MEM+10% FBS+1% P/S
- 其他:病毒敏感性: 对多种病毒敏感,包括: 牛病毒性腹泻病毒1 人脊髓灰质炎病毒1 人柯萨奇病毒B4 也对肠道病毒、鼻病毒、粘病毒和痘病毒家族中的成员敏感
LLC-MK2(Lilly Laboratories Cell-Monkey Kidney 2)细胞系是一种上皮细胞系,源自成年恒河猴(Macaca mulatta)的肾脏组织。LLC-MK2细胞最初由RN Hull保藏,广泛应用于生物医学研究中,尤其在病毒学研究中具有显著价值。
在培养方面,LLC-MK2细胞的贴壁生长依赖于适宜的培养基,且需选择经质量检测的血清作为补充。研究表明,大量的马血清能够显著促进其生长;而更换其他血清类型通常会导致生长速率降低,并出现较长的生长滞后期。
LLC-MK2细胞特性特征
LLC-MK2细胞对多种病毒表现出易感性,包括牛病毒性腹泻病毒1型、人脊髓灰质炎病毒1型和人柯萨奇病毒B4型。
LLC-MK2细胞还对肠道病毒、鼻病毒、痘病毒家族以及粘病毒等多种病毒具有较高的敏感性。
LLC-MK2细胞系表达纤溶酶原激活剂,这一特征使其在研究纤溶机制和相关疾病中具有潜在应用价值。
LLC-MK2细胞参数表
细胞名称 | LLC-MK2细胞(恒河猴肾细胞) |
细胞别称 | Llc-Mk2; LLC-MK-2; LLCMK2; LLcMK2; Lilly Laboratories Cell-Monkey Kidney 2 |
ATCC编号 | CCL-7 |
描述 | 源自六只成年绿猴的肾细胞悬液,对多种病毒敏感 |
种属 | 恒河猴(Macaca mulatta) |
组织来源 | 肾脏 |
形态 | 上皮细胞 |
生长方式 | 贴壁生长 |
无菌检测 | 细菌、酵母、支原体检测均为阴性 |
病原体检查 | HIV、乙型肝炎、丙型肝炎检查均为阴性 |
运输方式 | 复苏发货或干冰冷冻发货 |
安全性 | 所有肿瘤和病毒转染的细胞均视为有潜在生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护。 |
供应限制 | 仅供科学研究之用 |
培养基 | MEM+10% FBS+1% P/S |
温度 | 37°C |
气相 | 95%空气,5%二氧化碳 |
培养基更换频率 | 每2-3天更换一次 |
最佳细胞密度 | 达到80%-90%时进行传代 |
传代比例 | 推荐1:2至1:10 |
冻存液 | DMSO(终浓度10%) |
冻存条件 | -80°C保存2小时后转入液氮储存 |
基因表达 | 表达纤溶酶原激活剂 |
培养教程
LLC-MK2恒河猴肾细胞培养教程
收到LLC-MK2细胞后的处理
包装检查: 收到LLC-MK2细胞后,检查运输包装的密封性,确保LLC-MK2细胞培养瓶无破损、漏液或浑浊现象。若发现异常,请联系供应商。
显微观察: 去除LLC-MK2细胞培养瓶的封口膜,置于37℃培养箱中静置2-3小时后,利用显微镜观察LLC-MK2细胞的生长状态,确保细胞形态正常、无污染。
培养基更换: 倒掉原培养基,加入6 ml完全培养基(建议使用高糖DMEM培养基,添加10%胎牛血清),为LLC-MK2细胞提供最佳生长环境。
LLC-MK2细胞复苏
快速解冻: 将装有冻存LLC-MK2细胞的冻存管置于37℃水浴中快速解冻,轻轻摇晃以确保LLC-MK2细胞完全溶解。
离心清洗: 解冻后,立即加入4 ml预热的培养基,轻轻混匀,在1000 rpm条件下离心4分钟,去除上清液,减少冷冻保存介质对LLC-MK2细胞的影响。
重悬培养: 加入1-2 ml新鲜培养基重悬LLC-MK2细胞,将细胞悬液转移至新的培养瓶或10 cm培养皿中,补充约8 ml培养基,置于37℃培养箱中过夜培养。
培养基更换: 次日更换培养基,以去除LLC-MK2细胞冻存过程中残留的物质,同时观察细胞密度及状态。
LLC-MK2细胞传代
传代时机: 当LLC-MK2细胞铺满培养瓶的80%-90%时,应进行传代操作。
PBS清洗: 弃去旧培养基,用无钙镁PBS溶液轻轻洗涤LLC-MK2细胞1-2次,去除残留培养基成分。
胰酶消化: 加入1 ml胰蛋白酶-EDTA(0.25%胰酶和0.53 mM EDTA)溶液,放置在37℃孵育1-2分钟,待LLC-MK2细胞逐渐变圆脱落。
终止消化: 观察细胞消化情况,轻敲瓶壁后加入含血清的培养基终止消化。
离心重悬: 以1000 rpm离心4分钟,弃去上清后加入1-2 ml培养基重悬LLC-MK2细胞。
比例分装: 将LLC-MK2细胞悬液按1:2比例接种到新的培养皿或培养瓶中,并每瓶添加8 ml新鲜培养基。
LLC-MK2细胞冻存
准备工作: LLC-MK2细胞生长状态良好、无污染时,进行冻存操作。
细胞消化与计数: 弃去培养基,用PBS清洗一次,再加入1 ml胰酶消化,使LLC-MK2细胞脱落。随后加入等体积含血清的培养基终止消化,并进行细胞计数。
离心和重悬: 在1000 rpm条件下离心4分钟,弃去上清后根据细胞密度调整悬液体积,加入终浓度10%的DMSO和血清,制备LLC-MK2细胞悬液(密度不低于1 x 10^6/ml)。
分装与降温: 每支冻存管加入1 ml LLC-MK2细胞悬液,密封并标记。将冻存管放入程序降温盒中,以-1℃/分钟速率置于-80℃冰箱冷冻约2小时,然后转移至液氮罐中长期保存。
LLC-MK2细胞培养注意事项
培养基和血清质量: 使用经过质量检测的胎牛血清,确保无杂质或污染。马血清可显著促进LLC-MK2细胞增殖,若更换其他类型血清,可能导致LLC-MK2细胞生长减缓。
记录与观察: 建议在收到LLC-MK2细胞的前三天,每日拍摄显微图像,记录LLC-MK2细胞形态和密度变化,以便后续参考。
操作环境: 所有LLC-MK2细胞操作均应在二级生物安全柜中进行,且必须穿戴防护装备,严格遵守实验室安全操作规范。