PK-15细胞（猪肾细胞系）

PK-15细胞系是由Stice于1955年从精子猪的肾上皮细胞中分离建立，是PK-1a细胞的克隆系，具有迁移能力和稳定性。PK-15细胞在病毒学研究中应用广泛。PK-15常见细胞来自多种细胞库中，但部分来源的细胞系中存在人猪乳头状瘤病毒感染，PK-15细胞已成为病毒分离、鉴定、疫苗开发及C型逆病毒研究中的重要工具。

PK-15细胞特性特征

• PK-15细胞对多种病毒具有易感性

• 猪病毒：猪瘟病毒、非洲猪瘟病毒、水疱性口炎病毒（如格拉斯哥和奥赛株）、痘苗病毒

• 人类病毒：人腺病毒4型和5型、人柯萨奇病毒B2；人柯萨奇病毒B3；人柯萨奇病毒B4；人柯萨奇病毒B5；人柯萨奇病毒B6

• 基因表达：表达纤溶酶原激活物，这与细胞的增殖和迁移能力相关；表达角蛋白，表明其上皮细胞特性。

• PK-15细胞对猪圆环病毒（PCV）抗原呈阳性；通过免疫过氧化物酶染色，细胞角蛋白呈阳性。

• 内源性病毒：PK-15细胞含有内源性C型逆转录病毒。

• 病毒增殖与特性研究：PK-15细胞系能够支持多种病毒的增殖。
  

• C型病毒研究：电镜观察显示PK-15细胞内存在C型病毒颗粒，是研究C型病毒的重要材料。

• 培养基消耗快：PK-15细胞在培养过程中对培养基的消耗较快，需要定期更换培养基以维持健康状态。
  

• 粒产生：在培养过程中，PK-15细胞内及周围可能会产生较多颗粒，这属于正常现象。

PK-15细胞参数表

PK-15猪肾细胞系培养教程

PK-15细胞复苏

• 使用DMEM培养基（含10%胎牛血清FBS和1%青霉素-链霉素P/S），并在37℃预热30分钟，适合PK-15细胞的增殖需求。
  

• 预先37℃水浴锅，用于快速解冻PK-15细胞。

• 从液氮中取出PK-15细胞冻存管，立即放入37℃水浴中，轻轻摇晃，溶液充分沐浴（约1-2分钟）。
  

• 迅速取出冻存管，防止PK-15细胞因时间过长而死亡。

• 将解冻后的PK-15细胞悬液转移至离心管，加入4 mL预热的完全培养基，混匀后在1000 RPM下离心4分钟，取出DMSO。
  

• 弃去上清液，以降低对PK-15细胞的毒性。

• 使用1-2 mL完全脊髓吹打重悬PK-15细胞。
  

• 将细胞悬液移至T25培养瓶中，补充6-8mL细胞完全。

• 将PK-15细胞放入37℃、5% CO2培养箱中静置过夜，次日更换细胞，观察细胞状态是否正常。
  

PK-15细胞传代

• 当PK-15细胞的密度达到80%-90%时，就可以进行传代。
  

• 弃去培养上清，用透明、镁离子的PBS润洗PK-15细胞1-2次。
  

• 1 mL 0.25%胰酶-EDTA，轻轻晃动以覆盖整个PK-15细胞层加入。

• 在37℃培养箱中消化1-2分钟，观察PK-15细胞是否大部分变圆并捕获。

• 观察到大部分PK-15细胞脱落后，迅速添加2-3 mL细胞以终止胰酶消化。
  

• 在1000 RPM下离心4分钟，弃去上清后，使用新鲜培养基完全重悬PK-15细胞。
  

• 按1:3至1:5的比例将细胞均匀分配至新的培养瓶中。

• 加入8 mL完全培养基，继续在37℃、5% CO2环境中培养PK-15细胞。
  

PK-15细胞冻存

• 使用90%完全培养基和10% DMSO冻存液，适合PK-15细胞的冻存需求。
  

• 当PK-15细胞生长良好（80%-90%融合）时，按传代步骤收集并重悬于冻存液中。
  

• 将1 mL的PK-15细胞悬液分装至冻存管。
  

• 先放入-80℃冰箱中预冻24小时，然后转移至液氮罐进行长期保存，以维持PK-15细胞的存活率。

注意事项

• 无菌操作：培养PK-15细胞时，应严格无菌操作，避免污染。

• 细胞更换：每2-3天更换细胞，确保PK-15细胞生长环境稳定。

• 记录细胞状态：详细记录PK-15细胞的状态、传代次数及培养条件，保证实验的可追溯性和一致性。