小鼠原代骨骼肌细胞

小鼠骨骼肌细胞是从小鼠四肢骨骼肌组织分离得到的细胞，属于横纹肌的一种。骨骼肌在人体内占据重要地位，约占体重的40%，由多核的长柱形细胞组成，其细胞膜外部紧贴基膜。骨骼肌细胞在机体随意运动中起关键作用，依靠丰富的血管、淋巴组织以及躯体神经的支配实现收缩或舒张功能。根据其形态、大小、位置以及功能特点，骨骼肌可进一步命名，如斜方肌、菱形肌、三角肌等。

骨骼肌细胞的结构特点包括纤维状的外形、不分支的排列方式及明显的横纹。在细胞膜下方聚集着多个细胞核，细胞内部含有沿长轴平行排列的肌原纤维。肌原纤维由交替排列的明带（I带）和暗带（A带）组成，其中暗带中有H线和M线，明带中有Z线。两个Z线之间的区段被称为一个肌节，肌节是骨骼肌纤维的基本功能单位。

原代小鼠骨骼肌细胞的培养技术已非常成熟。通过对小鼠正常肌肉组织进行酶解消化，可高效分离出成肌细胞（myoblasts）。这些成肌细胞在适宜条件下融合形成多核的骨骼肌纤维。培养初期（约3天），细胞逐步贴壁并展伸，呈现梭形、不规则形、三角形或扇形等多样形态。核形多为卵圆形且居中分布。培养至两周后，细胞逐渐融合，纤维状细胞沿特定方向平行排列，有时在局部区域出现多层堆叠。传代培养后，细胞增殖加快，通常在4-6天即可达到汇合。

小鼠原代骨骼肌细胞在生理和病理研究中扮演重要角色，尤其是在肌肉再生、损伤修复等领域。由于小鼠模型的遗传学优势，常被用于基础科研和药物开发。标准化标记为SkMC（Skeletal Muscle Cells from Mouse）。

小鼠原代骨骼肌细胞特性特征

• 形态特征：小鼠骨骼肌细胞呈长柱形、不分支的纤维状，具有明显的横纹结构。每个细胞通常为多核，细胞核位于细胞膜下方，形态多样，包括梭形、不规则形和三角形等。
  

• 肌原纤维结构：肌细胞内部含有平行排列的肌原纤维，这些肌原纤维由相间的明带（I带）和暗带（A带）组成。明带染色较浅，而暗带染色较深，暗带中有H线，H线中部有M线，Z线则标志着肌节的边界。

• 基因表达：小鼠骨骼肌细胞表达多种与肌肉发育和功能相关的基因，如肌球蛋白重链（MyHC）、肌动蛋白（Actin）、肌钙蛋白（Troponin）等。这些基因在肌肉收缩和代谢过程中起着关键作用。
  

• 干细胞标记：成肌细胞通常表达一些干细胞标记物，如Pax7、MyoD和Myf5，这些标记物在成肌细胞增殖和分化过程中发挥重要作用

小鼠原代骨骼肌细胞参数表

小鼠原代骨骼肌细胞培养教程

细胞复苏

• 从液氮中取出小鼠原代骨骼肌细胞的冻存管，迅速放入37℃水浴中解冻，轻轻摇动以加速解冻过程。
  

• 当骨骼肌细胞完全解冻后，立即加入4 mL含10%胎牛血清（FBS）的DMEM培养基稀释DMSO，轻轻混匀。
  

• 将细胞悬液转移至15 mL离心管中，以1000 RPM离心4分钟，弃去上清液以去除DMSO。
  

• 用1-2 mL新鲜培养基重悬骨骼肌细胞，轻轻吹打使其均匀分散。
  

• 将重悬后的骨骼肌细胞转移至T25培养瓶中，加入8 mL新鲜培养基，并置于37℃、5% CO₂培养箱中培养过夜。
  

• 第二天，检查骨骼肌细胞密度，吸去旧培养基并更换新鲜培养基以去除残留的DMSO和非贴壁细胞。

细胞传代

• 当骨骼肌细胞的密度达到80%-90%时，准备进行传代操作。
  

• 吸去培养瓶中的旧培养基，用PBS溶液轻柔洗涤骨骼肌细胞一次，以去除残留培养基成分。
  

• 加入1 mL 0.125%胰蛋白酶溶液至培养瓶中，将其放入37℃培养箱内消化2-3分钟，观察骨骼肌细胞逐渐脱落。
  

• 当骨骼肌细胞大部分脱落后，加入等体积的培养基中和胰蛋白酶作用。
  

• 消化后的骨骼肌细胞转入离心管，以400-1000 RPM离心5分钟，弃去上清液后用新鲜培养基重悬。
  

• 按细胞浓度为0.5 × 10⁶ cells/mL，将骨骼肌细胞悬液接种至新T25培养瓶中，并继续在37℃、5% CO₂条件下培养。

细胞冻存

• 配制冷冻液，常用配方为60%基础培养基、30%胎牛血清、10%DMSO，或选用无血清冻存液。
  

• 选择生长状态良好的骨骼肌细胞，在对数生长期进行收集操作。离心去除上清液后，留下细胞沉淀。
  

• 用冷冻液将骨骼肌细胞重悬，浓度调节至1-5 × 10⁶ cells/mL。
  

• 将骨骼肌细胞悬液分装至冻存管中，封口后置于-80℃冷冻盒中，降温12-16小时。随后，将冻存管迅速转移至液氮中长期保存。