小鼠脐静脉平滑肌细胞（原代细胞）

小鼠脐静脉平滑肌细胞（Mouse Primary Umbilical Vein Smooth Muscle Cells，mPUVSMCs）是一种从小鼠脐带组织中分离得到的重要细胞类型，对心血管疾病的研究具有重要价值。

脐带作为连接胎儿和胎盘的管状结构，其中的脐静脉主要负责将胎盘提供的氧气和营养物质输送至胎儿，而脐动脉则运送胎儿的代谢废物返回胎盘。由于脐带是分娩后的废弃组织，其获取方便且无伦理争议，结合成熟的分离技术，脐静脉平滑肌细胞广泛应用于血管相关研究。脐静脉平滑肌细胞在培养早期具有贴壁生长能力，形态多样，包括梭形、不规则形、三角形或扇形，细胞核通常为卵圆形并居中。培养3天后开始贴壁伸展，约2周后细胞汇合，呈现长梭形态，胞质丰富，有分枝状突起，低密度时细胞交织成网状，高密度时则排列成旋涡状或栅栏状，传代后细胞生长迅速并保持典型形态学特征。脐静脉平滑肌细胞在调节血管收缩、舒张及修复方面发挥关键作用，是研究动脉硬化、高血压等疾病机制的重要模型，亦在药物筛选和再生医学领域具有广泛应用潜力。

小鼠脐静脉平滑肌细胞特性特征

• 标志性蛋白：脐静脉平滑肌细胞表达α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、波形蛋白和组织因子等平滑肌特异性标志物。
  

• 表面标志物：常见的表面标志物包括CD10、CD13、CD44、CD73和CD90，而不表达CD31、CD34或CD45。

• 基因表达：脐静脉平滑肌细胞在培养中能自我更新和扩增，并且具有向血管平滑肌、周细胞或血管内皮表型的分化潜能。其基因表达谱显示出与平滑肌功能相关的基因活跃

小鼠脐静脉平滑肌细胞参数表

原代细胞小鼠脐静脉平滑肌细胞培养教程

细胞复苏

• 从液氮中取出脐静脉平滑肌细胞冻存管，迅速放入37℃水浴中，轻轻摇晃加速解冻。
  

• 解冻后，立即将细胞悬液转移至含10%胎牛血清（FBS）和2%青霉素-链霉素的培养基中，以终止冻存液作用，确保脐静脉平滑肌细胞的生存率。

• 将细胞悬液转移至离心管，以1000 rpm离心5分钟，去除冻存液残留。
  

• 弃去上清液，加入适量培养基重悬脐静脉平滑肌细胞。

• 将重悬的脐静脉平滑肌细胞均匀接种至预先用1%明胶包被的培养瓶中。
  

• 将培养瓶放置于37℃、5% CO₂培养箱中静置24小时，确保脐静脉平滑肌细胞贴壁稳定。

细胞传代

• 观察脐静脉平滑肌细胞的生长状态，待细胞融合度达到80%-90%时进行传代。
  

• 用无钙镁PBS清洗培养瓶2次，去除残留培养基，避免影响脐静脉平滑肌细胞的后续消化效果。
  

• 加入0.125%胰蛋白酶-EDTA消化液，覆盖细胞表面后放入37℃ CO₂培养箱中消化1-2分钟。

• 观察显微镜下，当脐静脉平滑肌细胞变圆并脱壁时，立即加入含20% FBS的培养基终止消化。

• 用移液器轻轻吹打瓶底，制备单细胞悬液，确保脐静脉平滑肌细胞均匀分散。
  

• 以1000 rpm离心5分钟，弃去上清液后，加入新鲜培养基重悬脐静脉平滑肌细胞。

• 按1:3至1:5比例将脐静脉平滑肌细胞接种至新培养瓶中。
  

• 将培养瓶放入37℃、5% CO₂培养箱中，继续培养，并定期更换培养基以维持脐静脉平滑肌细胞的最佳状态。

细胞冻存

• 配制冻存液，使用90% FBS和10% DMSO的混合液，以最大限度保护脐静脉平滑肌细胞的活性。
  

• 在传代前24小时更换培养基以优化脐静脉平滑肌细胞的活性。
  

• 收集生长良好的脐静脉平滑肌细胞，胰酶消化后制备单细胞悬液。

• 以1000 rpm离心5分钟，弃去上清液后，按每5×10⁶/mL浓度将脐静脉平滑肌细胞重悬于冻存液中。
  

• 将装有脐静脉平滑肌细胞的冻存管静置于4℃环境1小时后，转移至-20℃冷冻1小时，再置于液氮表面冷却2小时。
  

• 最后，将冻存管浸入液氮中长期保存，确保脐静脉平滑肌细胞的长期存储稳定性。