大鼠脐带间充质干细胞（原代细胞）

原代大鼠脐带间充质干细胞（Rat Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells，rUC-MSCs）是从大鼠脐带组织中分离得到的一种成体干细胞。脐带间充质干细胞具有显著的增殖活性和较低的免疫原性，形态均匀，贴壁生长，呈梭形或多边形，常以平行排列或旋涡状集落形式生长。与骨髓或脂肪来源的间充质干细胞相比，脐带来源的干细胞具有更高的增殖能力和更低的免疫原性，且易于分离、扩增和纯化，传代扩增至30代以上仍能保持干细胞特性，因此更适合于大规模制备和应用。rUC-MSCs细胞广泛应用于组织工程、风湿免疫疾病治疗及细胞替代治疗研究中，可用于组织损伤修复、自体移植及相关机制的研究，能够通过免疫调节、抗炎和组织修复作用减轻移植物抗宿主病（GVHD）及其他移植相关并发症，在基础研究和临床转化中展现出重要价值。

大鼠脐带间充质干细胞特性特征

• 增殖能力: 脐带间充质干细胞具有较高的增殖活性，能够在体外快速扩增，并在传代培养中保持干细胞特性。

• 形态特征: 细胞形态均一，通常呈长梭状或多角形，贴壁生长，形成平行排列或旋涡状的集落。

• 自我更新与分化能力: 作为成体干细胞，具备自我更新能力和多向分化潜能，可以在适当条件下分化为骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞等多种类型的细胞。

• 表面标志物: 表达CD105、CD73、CD90等阳性标志物，而不表达CD45、CD34等造血标志物，这些标志物是鉴定间充质干细胞的重要指标。

• 免疫原性: 相较于其他来源的间充质干细胞（如骨髓和脂肪），脐带间充质干细胞具有更低的免疫原性，适合临床应用。

• 基因表达: 在不同诱导条件下，脐带间充质干细胞能够表达与成脂、成骨和成软骨相关的基因，如R-SOX9和R-COL2a1等，这些基因的表达与其分化潜能密切相关。

• 细胞因子分泌: 大鼠脐带间充质干细胞可分泌多种生长因子和细胞因子，如转化生长因子β（TGF-β）、血小板源生长因子（PDGF）等，这些因子在组织修复和再生中发挥重要作用。

• 抗炎作用: 脐带间充质干细胞还具有免疫调节和抗炎作用，可以减轻移植物抗宿主病（GVHD）及其他移植相关并发症

大鼠脐带间充质干细胞参数表

原代大鼠脐带间充质干细胞培养教程

细胞复苏

• 准备工作
  从液氮罐中取出冻存的UCMSC细胞，迅速放入37℃水浴中快速解冻，轻轻摇晃至冰块完全融化。

• 稀释细胞悬液
  将解冻后的UCMSC细胞悬液转移至含有10倍体积完全培养基的离心管中，轻轻混匀，以稀释冻存液中的二甲基亚砜（DMSO）。

• 离心
  以1000 rpm离心5分钟，弃去上清液，保留UCMSC细胞沉淀。

• 重悬细胞
  用适量新鲜的完全培养基（如α-MEM培养基，含10%胎牛血清）重悬细胞沉淀，调整细胞浓度至适当范围。

• 培养
  将细胞悬液转移至培养瓶或培养皿中，加入适量培养基，使培养基覆盖整个培养表面，放入37℃、5% CO₂的培养箱中培养。

• 更换培养基
  细胞复苏后2-4天内，观察UCMSC细胞贴壁情况。待贴壁稳定后，更换培养基以去除死细胞和碎片，补充新鲜营养物质。

细胞传代

• 培养观察
  当UCMSC细胞的融合率达到70%-90%时，应进行传代培养，以避免过度接触抑制影响细胞活性。

• 消化步骤
  （1）用PBS清洗培养瓶两次，去除残留的血清和废液。
  （2）加入0.25%胰酶-EDTA消化液，覆盖细胞单层，置于37℃培养箱中消化1-3分钟，直至细胞开始收缩、圆形化。

• 终止消化
  加入含血清的培养基中和胰酶作用，轻轻吹打细胞使其完全脱落。

• 离心与重悬
  以1000 rpm离心5分钟，弃去上清液后，用新鲜培养基重悬UCMSC细胞沉淀。

• 接种与培养
  根据实验需要，将UCMSC细胞按1:2或1:3的比例接种至新的培养瓶中，加入适量培养基，继续在37℃、5% CO₂条件下培养。

细胞冻存

• 冻存液制备
  使用含10% DMSO和90%胎牛血清的冻存液，或使用商业化无血清冻存液，确保UCMSC细胞冻存的高存活率。

• 细胞收集
  按照传代步骤消化UCMSC细胞，离心后收集细胞沉淀。

• 重悬与分装
  用冻存液重悬细胞，调整细胞密度至2.5×10⁶ cells/mL，并将细胞悬液分装至冻存管中，每管1 mL。

• 程序性降温
  将冻存管置于程序降温盒中，以每分钟1℃的降温速度降至-80℃，在-80℃冷冻保存24-72小时。

• 长期储存
  冷冻管转移至液氮罐中储存，确保UCMSC细胞的长期活力和功能完整性。