MRC-5人胚肺成纤维细胞

MRC-5人胚肺成纤维细胞是一种可以制造疫苗（包括甲型肝炎、脊髓灰质炎和MCR-5）的二倍体细胞系。由J.P. Jacobs于1966年9月从一名27岁流产女性的14周男性胚胎的肺组织中分离而建立。MRC-5细胞是成纤维细胞样的，贴壁生长。MRC-5细胞对人类病毒易感，包括人类脊髓灰质炎病毒1型、单纯疱疹病毒和水泡性口炎病毒等。

MRC-5细胞的染色体数目为46个，属于正常二倍体细胞系，核型为46，XY。在培养基中，MRC-5细胞表现出成纤维细胞样的形态学特征，包括长梭形的外形、丰富的胞浆以及变形的细胞核。MRC-5细胞具有较高的增殖能力，在老化前能传代42到46次群体倍增，目前已被用于疫苗生产，包括甲型肝炎、小儿麻痹症、麻疹混合疫苗、水痘疫苗和脊髓灰质炎疫苗等的研发。

MRC-5细胞被证实为非恶性细胞，不具有肿瘤形成的能力，在体外细胞实验中相对安全。

逆转录酶表达阴性的特性表明MRC-5缺乏完整的逆转录病毒基因组。有研究显示，MRC-5很可能是未定义的人脐带来源的间充质干细胞系（MSC），并且其表面标记物表达结果与MSC几乎相同。这些细胞具有非致瘤性和极低的端粒酶活性。此外，MRC-5能够有效抑制丝裂原活化的淋巴细胞增殖，并促进调节性T细胞的增加。它们还对炎性细胞因子如IFN-γ和TNF-α做出响应，并表达IDO1。

MRC-5人胚肺成纤维细胞很可能是未定义的人脐带来源的间充质干细胞系（MSC），其与MSC相似的表面标记物表达结果进一步支持了这一观点。这些细胞具有非致瘤性且端粒酶活性极低的特性，能够有效抑制丝裂原活化的淋巴细胞增殖，并促进调节性T细胞的增加。此外，它们还对炎性细胞因子如IFN-γ和TNF-α做出响应，并表达IDO1。

MRC-5细胞系病毒易感性：人类脊髓灰质炎病毒，单纯疱疹病毒，水泡性口腔炎，格拉斯哥（印第安纳州），水泡性口腔炎（印第安纳州），因此，MRC-5人胚肺成纤维细胞常被用于疗效试验、转染宿主、细胞毒性和病毒灭绝试验。

MRC-5人胚肺细胞产品参数表

MRC-5人胚肺细胞生长速率图

HMRC-5人胚肺细胞注意事项

该细胞为有限传代细胞系，传代次数过高会导致细胞生长特性发生变化，建议到货3代内完成实验。

培养条件：

MRC-5细胞推荐使用MEM培养基，并添加10%特级胎牛血清，1%NEAA、1%丙酮酸钠和1%谷氨酰胺。在培养过程中，维持气相为空气95%和CO2 5%，温度为37℃。

培养步骤：

收到细胞后，先观察培养瓶是否完好，若有异常情况及时与提供细胞的机构联系。

用75%酒精处理培养瓶表面，然后将培养瓶置于37℃培养箱中静置2-4小时，以稳定细胞状态。

将培养基预热至37℃。

吸取培养瓶中大部分培养基，并留下10-12ml，观察MRC-5人胚肺成纤维细胞密度并拍照记录。若细胞密度大于80%，即可进行传代培养。

如细胞密度低于70%，可留下8-10ml培养基继续培养，直至细胞密度达到80%以上再进行传代培养。

若进行传代培养，先吸取原有培养基，然后加入胰酶消化1-2分钟，观察细胞变圆脱落后加入适量的含血清的培养基终止消化。

轻轻混匀细胞后，以适当的速度离心5分钟，弃去上清液，并补充1-2ml新的培养基。

将MRC-5人胚肺成纤维细胞均匀地分到新的培养瓶中，补足培养基，并放回培养箱中培养。

细胞冻存：

将细胞按照传代步骤进行消化，并离心至获得细胞沉淀。

加入预先配制好的冻存液轻轻重悬细胞，并转移至标记好的冻存管中。

将冻存管放入程序性冻存盒中，然后置于-80℃冰箱过夜。

24小时后，将细胞转移到液氮保存，并记录细胞保存位置。

细胞复苏：

准备完全培养基并准备37℃水浴器。

从液氮中取出MRC-5人胚肺成纤维细胞，迅速放入37℃温水中融化，然后离心1-2分钟。

弃去冻存液，加入完全培养基轻轻重悬细胞，然后接种至培养皿。