悬浮细胞传代培养

大多数原代培养物、有限细胞系和连续细胞系都依赖于贴壁，因此会以单层形式附着在表面生长。其他细胞，特别是来自造血或某些肿瘤组织的细胞，则不依赖于贴壁，而是悬浮生长.

悬浮细胞的培养

将完全生长培养基放入水浴中，加热至适当的温度（通常为 37°C）。

充分混合细胞/培养基悬浮液；使用移液器将生长在固定烧瓶中的细胞悬浮。取出少量细胞悬浮液，使用血细胞计数器和活体染色剂测定细胞密度和活力。

计算以该细胞系的最小密度重新接种烧瓶所需的细胞量，同时考虑将使用的新鲜培养基的量。

将适量培养基加入培养容器中，然后加入细胞悬浮液。不要将浓缩的细胞悬浮液加入空烧瓶中。同一培养容器可以重复使用，但由于烧瓶开口处会积聚少量培养基，因此每次重新接种时污染的可能性都会增加。

如果有必要的话，用无菌过滤的CO2向烧瓶中充满空气，密封烧瓶，然后在适当的温度下孵育。

通常不需要完全更换培养基，除非细胞密度非常高或培养基的 pH 值为酸性（因酚红而呈黄色）。要完全更换培养基，请轻轻离心细胞（125 × g，10 分钟），倒出培养基，然后以较低的接种密度将细胞重新悬浮在新鲜培养基中。