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细胞培养之细胞计数方法
细胞培养之细胞计数方法
细胞计数对于确定或监测生长率以及建立已知细胞数的新培养物是必不可少的。血细胞计数器通常用于估计细胞数和确定细胞活力。血细胞计数器是一种相当厚的玻璃载玻片，带有两个计数室，每侧一个。每个计数室都有一个镜面，其中有 3 × 3 毫米的网格，其中包含 9 个计数方格。（见图。）计数室的侧面凸起，可将盖玻片固定在距计数室底部恰好 0.1 毫米的位置。9 个计数方格中的每一个可容纳 0.0001 毫升的体积。
血球计数器非常适合测定细胞活力，但由于实际计数的细胞数量相对较少，因此无法精确测定细胞数量。自动计数器将生成最可靠的数据，尤其是与血球计数器的活力数据结合使用时。
按照下列步骤计数细胞：
清洁、彻底干燥血细胞计数器并将其与盖玻片一起组装。
将少量细胞悬浮液转移到两个计数室的边缘。让细胞悬浮液通过毛细管作用被吸入计数室。
将血细胞计数器放在倒置显微镜下，以 100 倍放大倍数观察细胞。
重点关注图中标记为 1、2、3 和 4 的象限。
记录每个切片中的细胞数。计算细胞数的平均值，然后乘以稀释倍数。如果细胞未经稀释，则该倍数为 10 4 个细胞/毫升。从细胞悬浮液中取出后，对样本进行的任何稀释（例如使用活体染色）均需计入计算中。
例如，如果四个计数分别为 60、66、69 和 75，则装入血细胞计数器的样本浓度为 68 × 10 4 个细胞/毫升。为获得最佳结果，请调整悬浮液浓度，使四个部分中各有 50 至 100 个细胞。
大多数培养物将在初始接种细胞浓度为 10 3至 10 4 个细胞/cm 2时生长。生长较快的培养物通常设置在较低的浓度下。有些培养物除非最初添加最低浓度的细胞，否则生长不良
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