
人口腔上皮细胞(原代细胞)
- 来源:口腔黏膜组织
- 细胞特征:贴壁细胞 , 上皮细胞样
- 培养基:原代上皮细胞专用培养基,含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
- 其他:增殖能力:能够在体外持续生长;基因表达:表达角蛋白(如KRT14、KRT4)、E-cadherin等
原代人口腔上皮细胞是从健康个体的口腔黏膜(主要为颊部和舌部区域)中分离获得的一类复层扁平上皮细胞。人口腔上皮细胞呈扁平或多边形,形态不规则,贴壁生长,基底层细胞为矮柱状,具有较强的增殖和分化能力,可不断更新替代表层脱落的细胞。
细胞培养采用含表皮生长因子(EGF)的特定培养基,有助于维持其增殖能力和表型特征。原代人口腔上皮细胞广泛应用于口腔疾病研究、药物筛选和黏膜免疫研究中,是研究口腔癌、口腔溃疡等疾病的重要体外模型。
人口腔上皮细胞特性特征
原代人口腔上皮细胞表达多种与上皮细胞功能相关的基因,包括角蛋白(如KRT14、KRT4)和粘附分子(如E-cadherin),这些基因对于维持上皮屏障功能至关重要。
人口腔上皮细胞可能表达转化生长因子β(TGF-β),该因子在组织修复和纤维化过程中起着重要作用。此外,生长因子如表皮生长因子(EGF)也可能影响其增殖和分化。
原代人口腔上皮细胞参与多条信号通路,如MAPK通路和PI3K/Akt通路,这些通路与细胞增殖、存活及应激反应密切相关。
由于其良好的增殖能力和生物相容性,原代人口腔上皮细胞被广泛应用于口腔疾病机制研究、药物筛选及毒理学测试
人口腔上皮细胞参数表
细胞名称 | 人口腔上皮细胞(原代细胞) |
来源 | 健康个体的口腔黏膜组织 |
形态 | 扁平或多边形,上皮细胞,形成复层扁平上皮结构 |
纯度 | 通常高于90% |
生物安全性 | 不含HIV-1、HBV、HCV等病原体 |
细胞周期 | 增殖周期约为24小时 |
干细胞特性 | 基底层细胞具备增殖和分化能力 |
培养基 | 原代上皮细胞专用培养基,含 FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 |
培养条件 | 气相:空气,95%;CO2,5% 温度:37℃ |
培养方式 | 贴壁培养 |
传代频率 | 每2-3天更换培养基,达到80%-90%融合度时进行传代 |
初始接种密度 | 每平方厘米约1-2万细胞 |
增殖能力 | 能够在体外持续生长 |
信号通路 | 参与MAPK通路和PI3K/Akt通路 |
基因表达 | 表达角蛋白(如KRT14、KRT4)、E-cadherin等 |
生长因子 | 表达TGF-β和EGF等影响细胞增殖和分化的因子 |
代谢特性 | 能够进行有氧呼吸,适应不同的营养条件 |
应用领域 | 用于基础研究、药物开发、毒理学测试、口腔疾病机制研究等 |
注意事项 | 建议用多聚赖氨酸 PLL(0.1mg/ml)或明胶(0.1%)对接种培养皿包被处理 |
培养教程
原代人口腔上皮细胞培养教程
人口腔上皮细胞的提取和分离
在局部麻醉下,通过小型手术或活检从口腔黏膜(主要为颊部)获取组织样本,提取人口腔上皮细胞。
使用消毒牙签在口腔内壁轻轻刮取黏膜,避免损伤牙齿或其他组织,以获取高质量的人口腔上皮细胞。
将获取的黏膜组织置于含有生理盐水的无菌培养皿中,切碎组织以释放人口腔上皮细胞。
使用0.2%-0.3%的胶原酶消化组织30-60分钟,帮助分离人口腔上皮细胞。
消化结束后,用离心机低速离心(300g,5分钟)收集人口腔上皮细胞。
将人口腔上皮细胞沉淀重悬于含有培养基的悬液中,准备进行培养。
人口腔上皮细胞的培养
将分离得到的人口腔上皮细胞悬液接种到培养瓶中,加入预先准备好的DMEM或F-10培养基。
培养初期,每2-3天更换一次培养基,维持人口腔上皮细胞的生长环境。
使用显微镜观察人口腔上皮细胞的形态,健康的细胞呈扁平或多边形,贴壁生长。
观察到人口腔上皮细胞融合度达到80%-90%时,准备进行细胞传代。
人口腔上皮细胞的传代
用PBS(磷酸盐缓冲液)洗涤人口腔上皮细胞,去除残留的培养基。
加入0.25%的胰蛋白酶,消化人口腔上皮细胞1-2分钟,使其脱落。
中和胰蛋白酶后,轻轻吹打使人口腔上皮细胞悬浮。
将人口腔上皮细胞悬液按照1:2至1:3的比例稀释,并转移到新的培养瓶中,加入新鲜培养基。
注意事项
在提取和培养人口腔上皮细胞的过程中,所有操作需在无菌环境中进行,以防止污染。
保持培养箱温度在37℃,CO₂浓度为5%,以提供适宜的环境,促进人口腔上皮细胞的健康生长。
每2-3天更换培养基,提供新鲜营养,并清除代谢废物,以维持人口腔上皮细胞的最佳生长状态。
定期显微镜观察,若发现人口腔上皮细胞异常生长或污染,应及时处理。
为长期保存人口腔上皮细胞,可用10% DMSO的冷冻保护液处理细胞,并置于液氮罐中储存,以维持细胞活性。
相关资料
STR鉴定及相关
参考文献
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