货号：STM-CE-1312 规格：5×10⁵cells/T25细胞培养瓶

原代人牙龈成纤维细胞（HGF细胞）

来源：牙龈结缔组织
细胞特征：贴壁细胞；成纤维细胞样
培养基：原代成纤维细胞专用培养基
其他：能大量分泌Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白及糖胺聚糖，并在牙龈创伤修复与组织重塑中发挥核心作用

Tags：牙龈成纤维细胞

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原代人牙龈成纤维细胞特性特征

在原代培养中传代能力有限，通常在 8–10 代内保持较稳定形态与功能，随传代数增加出现增殖下降、衰老和表型漂移。
对培养条件和消化条件较敏感，需要相对温和的消化和成纤维细胞专用培养基。
高表达 ECM 相关基因（如 COL1A1、COL3A1、FN1 等）。在低传代时表达增殖相关基因较高，具有良好增殖能力；随传代增加，可能出现衰老和表型漂移。
具有较强增殖与迁移能力，可在牙龈创伤、手术或炎症后参与肉芽组织形成和组织重塑。
能产生基质金属蛋白酶和其抑制因子，参与 ECM 降解与重建平衡。
能分泌多种细胞因子和生长因子（如炎症因子、趋化因子、生长因子等），参与局部炎症反应调控。
在牙周炎等疾病中与免疫细胞和菌体成分（如细菌产物、LPS 等）形成调控网络，影响炎症程度和组织破坏。
细胞骨架以 Vimentin 为主，呈间充质/成纤维细胞特征、一般不表达或极低表达上皮相关标志（如细胞角蛋白、E-cadherin），可与牙龈上皮细胞区分。
在特定刺激（如 TGF-β、炎症因子）下，可上调 α-SMA，呈现向“肌成纤维细胞样”表型转化的趋势。
受炎症或细菌成分刺激时，可诱导炎症因子、趋化因子及 MMP 等基因表达上调，用于模拟牙周炎等病理状态。

原代人牙龈成纤维细胞参数表

英文名称	Human Gingival Fibroblasts
常用缩写	HGF / hGF / HGnF
细胞类型	人原代成纤维细胞（primary human gingival fibroblasts）
组织来源	人牙龈固有层结缔组织（多来自健康附着龈/边缘龈）
胚层来源	中胚层，口腔黏膜间充质细胞
主要功能定位	牙龈结缔组织主要结构与功能细胞，负责 ECM 合成、组织支持及修复
用途范围	仅供科研使用，不用于临床诊断或治疗
牙周状态	健康牙龈 / 轻度牙龈炎 / 牙周炎患者（通常为健康或轻度炎症区外）
取材部位	附着龈、边缘龈或牙龈乳头等
生长方式	贴壁生长
典型形态	细长梭形或纺锤形，突起明显；细胞核椭圆形，细胞呈平行、放射状或漩涡状排列
接触抑制	高密度时增殖减缓，形成单层
倍增时间	约 24–72 h（视培养条件和传代数而定）
建议使用传代范围	≤P8–P10 内保持形态和功能相对稳定
低传代特征	增殖能力强，典型成纤维细胞形态清晰
高传代变化	增殖能力下降，细胞变大变扁，出现衰老和表型漂移
主要阳性标志	Vimentin、Collagen I、Fibronectin 等（免疫染色/RT‑qPCR 可验证）
主要阴性标志	细胞角蛋白（Cytokeratin）、E‑cadherin、CD31、CD45 等一般阴性
诱导性标志	α‑SMA 在 TGF‑β、张力或炎症因子刺激下上调，提示肌成纤维细胞样表型
ECM 相关基因	高表达 COL1A1、COL3A1、FN1 等基因，反映 ECM 合成功能
炎症相关分子	可表达/诱导 IL‑6、IL‑8 等炎症因子和多种趋化因子（刺激依赖）
基质降解分子	可表达 MMP1、MMP3、MMP9 等及其抑制因子 TIMPs（条件依赖）
受体与通路	表达部分 TLRs（如 TLR2/4），受 TGF‑β/Smad、NF‑κB、MAPK 等通路调控
菌污染检测	细菌、真菌检测阴性
支原体检测	阴性
纯度说明	成纤维细胞纯度高，无明显上皮/内皮/免疫细胞污染
推荐基础培养基	原代成纤维细胞专用培养基（STM-CM-0120）
血清类型与浓度	胎牛血清（FBS）约 5–10%
额外添加物	必要时加入成纤维细胞生长补充物、抗生素（P/S），长期培养可考虑减少抗生素依赖
培养温度	37 ℃
CO₂ 浓度	5% CO₂，95% 空气，饱和湿度
氧浓度	一般为常氧（约 21% O₂），如采用低氧需单独说明
推荐接种密度	约 5×10⁴–1×10⁵ cells/cm²（可按说明书或经验调整）
传代起始融合度	约 80–90% 融合传代
传代比例	常用 1:2 或 1:2–1:3
换液频率	每周 2–3 次，根据 pH 和细胞密度调整
培养容器	组织培养处理的瓶/板（T25、T75、6 孔板等）
常用消化液	低浓度胰酶或胰酶/EDTA，有时联合低浓度胶原酶，尽量温和
消化时间	约 1–3 min，显微镜下实时观察，细胞刚刚脱落即终止
终止消化方式	加入含血清培养基终止胰酶作用，轻柔吹打分散细胞
传代周期	一般 2–4 天传代一次（视倍增时间和密度而定）
冻存液配方	基础培养基 + 10–20% FBS + 5–10% DMSO（典型配方，可按说明书微调）
冻存程序	约 −1 ℃/min 程序降温至 −80 ℃，再转液氮气相长期保存
复苏方法	37 ℃ 快速水浴融化，去掉 DMSO 后接种入预温培养基
复苏后活率	一般 ≥80–90%
复苏恢复时间	24–48 h 内贴壁、伸展恢复，之后进入稳定增殖期
主要生物学功能	ECM 合成与重塑、创伤修复、炎症调控、牙龈组织力学支持
炎症应答特点	对细菌产物（如 LPS）及炎症因子敏感，可显著上调炎症因子和 MMP 表达
典型研究方向	牙周炎/牙龈炎机制，牙龈创伤修复与再生，口腔材料生物相容性与炎症反应，口腔黏膜屏障及信号通路研究
共培养兼容性	可与牙周膜细胞、上皮细胞、内皮细胞、免疫细胞等共培养，构建牙周微环境模型
推荐代次范围	形态/材料实验：≤P8–P10；功能/基因表达实验：优选 ≤P6–P8
关键注意事项	控制传代次数，避免过度消化和反复冻融，保持无支原体污染，注意严格无菌和伦理合规

培养教程

原代人牙龈成纤维细胞培养教程

hgf细胞复苏时，需提前将完全培养基于 37 ℃ 预温，并在已标记的培养瓶（如 T25）中加入 5–7 mL 预温培养基备用。确认培养箱处于 37 ℃、5% CO₂ 稳定状态后，从液氮罐中取出 hgf细胞冻存管，迅速置于 37 ℃ 水浴中快速融化，控制在 1–2 min 内完成，避免水面没过管盖。融化后立即用 75% 酒精消毒冻存管外壁，并在生物安全柜中将细胞悬液转移至离心管，缓慢加入 8–10 mL 预温培养基以逐步稀释 DMSO。随后以约 200 g 离心 3–5 min，弃去上清，用 1–2 mL 完全培养基轻柔重悬细胞，将 hgf细胞接种至预先准备好的培养瓶中，轻轻摇匀后置于培养箱中培养。复苏后 12–24 h 进行首次换液，以去除残余 DMSO 和死亡细胞碎片。一般在 4–6 h 可观察到部分 hgf细胞开始贴壁，24 h 后大多数细胞贴壁并呈典型成纤维细胞形态。
当 hgf细胞融合度达到 80%–90% 时进行传代。传代前需确认细胞形态正常、无明显颗粒变性或污染。弃去旧培养基后，用无钙镁 PBS 轻柔冲洗一次，加入 1–2 mL 预温胰酶/EDTA 消化液覆盖细胞层，在 37 ℃ 条件下消化 1–3 min，并在显微镜下观察。当 hgf细胞变圆、边界清晰且轻敲瓶壁后开始脱落时，立即加入 3–4 倍体积含血清完全培养基终止消化。收集细胞悬液并离心，弃上清后重悬细胞，按 1:2 或 1:2–1:3 的比例分装至新培养瓶中，补足培养基体积后继续培养。建议优先使用 P3–P8 代 hgf细胞用于功能实验，并在传代后 12–24 h 内避免频繁移动培养瓶。
hgf细胞冻存应选择处于对数生长期、融合度约 80%–90%、状态良好的细胞。按照常规消化步骤收集细胞后离心弃上清，在冰上用预冷冻存液重悬细胞，常用冻存密度为 1×10⁶–5×10⁶ cells/mL。将细胞悬液分装入已标记的冻存管中，放入程序降温盒，于 −80 ℃ 冰箱中以约 −1 ℃/min 的速率降温 12–24 h，随后转入液氮气相中长期保存。整个冻存过程中应尽量缩短 hgf细胞暴露于 DMSO 的时间，避免反复冻存和复苏，以减少表型漂移和功能衰减。