大鼠牙周膜成纤维细胞（原代细胞）

大鼠牙周膜成纤维细胞（Periodontal Ligament Fibroblasts, PLFs）来源于大鼠牙周膜组织，牙周膜是连接牙齿与牙槽骨的重要结构，由致密结缔组织构成，并含有神经、血管、淋巴管及上皮细胞，以维持牙周组织的稳态。PLFs细胞是牙周膜的主要间质细胞，形态呈梭形或星形，细胞核较大，核仁明显，胞质透明，具有合成胶原蛋白、糖蛋白及弹力纤维的能力，同时能够降解胶原并参与牙周组织的病变、修复及再生过程。

大鼠牙周膜成纤维细胞在牙周组织修复及再生过程中发挥关键作用，与成骨细胞相互调控，影响成骨分化，并广泛应用于牙周疾病的体外模型构建，以研究牙周组织的损伤及再生机制。此外，大鼠牙周膜成纤维细胞在牙周再生材料的生物相容性评估中也具有重要价值，如功能化聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）在牙周炎相关骨缺损修复中的潜力。

大鼠牙周膜成纤维细胞特性特征

• 形态特征： 成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。

• 细胞形态 成纤维细胞样、贴壁生长。

• 主要功能： 牙周膜成纤维细胞是牙周膜的主要间质细胞，具有合成胶原、基质、弹力纤维和糖蛋白的功能，还有吸收胶原吞噬异物的能力，还参与了牙周组织的病变、修复及再生过程。
  

• 蛋白表达： 纤维连接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）免疫荧光染色为阳性。

• 体外模型： 利用牙周膜细胞建立体外模型，已经成为研究牙周组织疾病的重要手段。

• 相互作用： 牙周膜成纤维细胞与成骨细胞相互调控，共同参与牙周组织再生。牙周膜成纤维细胞能抑制成骨细胞的成骨作用，而成骨细胞则能诱导牙周膜成纤维细胞向成骨样细胞分化

大鼠牙周膜成纤维细胞参数表

原代大鼠牙周膜成纤维细胞培养教程

细胞复苏

• 快速解冻： 从液氮中取出 plfs细胞 冻存管，立即放入 37℃水浴 中快速摇晃，使其在 1-2 分钟内完全融化。

• 离心去除冷冻液： 迅速将细胞悬液转移到 5-10 mL 完全培养基 中，并以 1000-2000 rpm 离心 5-10 分钟，去除冷冻保护剂。

• 重悬细胞： 小心吸除上清液，加入 适量完全培养基 轻轻吹匀，使细胞均匀分散。

• 接种培养： 将细胞悬液转移至 培养瓶或培养板，补充适量培养基，置于 37℃、5% CO₂ 培养箱 内培养。

• 静置稳定： 细胞复苏后 静置培养 3-4 小时，避免干扰，以便 plfs细胞 适应新环境。

• 换液优化： 复苏后的 前3天建议每天更换培养基，以去除残留 DMSO，并提供新鲜养分促进细胞恢复。

细胞传代

• 观察细胞密度： 当 plfs细胞 贴壁生长达到 80%-90% 汇合度 时，可进行传代。

• PBS清洗： 吸弃旧培养基，用 无钙镁 PBS 缓冲液 轻柔清洗细胞 1次。

• 消化细胞： 加入 0.25% 胰蛋白酶（EDTA 可选），室温静置 1-2 分钟，直至细胞变圆脱落（显微镜观察）。

• 终止消化： 迅速加入 含血清的完全培养基 中和胰酶，并轻轻吹打，使细胞分散。

• 离心收集细胞： 以 1000-2000 rpm 离心 5-10 分钟，弃去上清，加入培养基重悬。

• 细胞接种： 按 1:2 - 1:6 比例 将 plfs细胞 重新分瓶，加入新鲜培养基，继续培养。

• 培养环境： 置于 37℃、5% CO₂、95% 湿度 的培养箱中，确保细胞增殖良好。

• 定期换液： 每 2-3 天更换一次培养基，避免代谢产物积累，保持培养环境稳定。

细胞冻存

• 收集细胞： 选择生长状态良好的 plfs细胞，消化后离心，去除培养基。

• 制备冻存液： 使用 90% 完全培养基 + 10% DMSO 配制 冻存液，并将 plfs细胞 重悬至适当浓度（5×10⁵ cells/mL）。

• 分装细胞： 将细胞悬液均匀分装至 冻存管，确保密封良好。

• 程序降温： 置于 -80℃ 冰箱 中 程序降温（每分钟降低 1℃），确保细胞存活率。

• 液氮长期保存： 24小时后，将冻存管转移至 液氮储存（-196℃），避免细胞损伤。

培养条件

• 培养基： plfs细胞 适用的特定完全培养基（可参考供应商推荐方案）。

• 培养温度： 37℃，保持恒温状态。

• CO₂浓度： 5%，确保细胞生长所需的弱酸性环境。

• 湿度要求： 95% 湿度，防止培养液蒸发，维持细胞稳定。

• 换液频率： 每2-3天更换一次培养基，保持最佳培养环境。

注意事项

• 解冻速度要快，避免冰晶损伤；水浴解冻时间不宜过长（控制在 1-2 分钟 内）。

• plfs细胞消化时间不可过久，以防细胞损伤，建议在显微镜下监测状态。

• 冻存前细胞状态需良好，避免高传代数或状态差的细胞进行冻存，以确保复苏存活率。

• 传代比例应根据细胞生长情况调整，一般 1:2 - 1:6，避免过度稀释或密度过高影响生长。

• 严禁使用污染的培养基或试剂，确保无菌操作，防止细胞污染影响实验数据