小鼠心肌成纤维细胞（永生化细胞）

小鼠心肌成纤维永生化细胞（Mouse Cardiac Fibroblasts，MCFs）是一类源自小鼠心脏组织、经基因工程手段（如SV40大T抗原、hTERT或HPV E6/E7）处理后获得持续增殖能力的成纤维细胞，具有典型的成纤维细胞形态，贴壁生长，呈梭形或星形，克服了原代细胞生长缓慢、传代受限、技术门槛高等缺点，适用于长期稳定培养。小鼠心肌成纤维永生化细胞具有良好的免疫调节能力，可分泌多种细胞因子与趋化因子。MCFs细胞广泛应用于心脏纤维化发生机制研究、抗纤维化药物筛选、心肌细胞共培养系统构建、TGF-β/Smad、Wnt/β-catenin、MAPK/ERK等信号通路解析以及三维心脏组织工程等方向，是心血管疾病基础研究和转化医学领域的重要细胞模型。

小鼠心肌成纤维永生化细胞特性特征

• 形态：成纤维细胞样，贴壁生长，形态呈长梭形或星形。

• 功能活动：保持了成纤维细胞的基本功能，如合成和分泌细胞外基质成分。

• 修复作用：在心脏疾病中发挥关键作用，尤其是在心脏纤维化过程中。

• 转化能力：可被TGF-β1等刺激诱导为心肌成肌纤维样表型。

• 蛋白质合成：能够合成和分泌多种细胞外基质成分，如胶原（Collagen I/III）、纤维连接蛋白（Fibronectin）。

• 信号通路：TGF-β响应通路活跃，参与Wnt/β-catenin、TGF-β/Smad、ERK等信号通路。

• 阳性标志物：Vimentin、α-SMA（活化状态）、FSP1/S100A4。

• 阴性标志物：心肌细胞标志（如cTnT、α-actinin）。

• 生长速度：可在体外稳定传代20代以上。

• 免疫可塑性：在特定刺激下分泌多种趋化因子和细胞因子。

• 应用领域：心脏纤维化机制研究、药物筛选与抗纤维化研究、心肌细胞-成纤维细胞共培养模型、信号通路研究、体外3D心脏组织工程研究等

小鼠心肌成纤维细胞参数表

小鼠心肌成纤维永生化细胞培养教程

mcfs细胞复苏流程

• 快速解冻：将mcfs细胞冻存管从液氮中取出后迅速放入37℃水浴中轻轻摇晃，1分钟左右使细胞完全解冻。

• 消毒步骤：使用75%酒精充分擦拭冻存管外壁，防止污染。

• 离心去除DMSO：将细胞悬液转入预温的15 ml离心管中，加入5 ml完全培养基（含10%胎牛血清+1%抗生素），1000 rpm离心5分钟，去除上清。

• 细胞重悬与接种：用2 ml新鲜完全培养基重悬mcfs细胞，并均匀转移至T25培养瓶，置于37℃、5% CO₂培养箱内继续培养。

mcfs细胞传代操作

• 贴壁情况检查：复苏后的mcfs细胞需在24小时内贴壁，如未贴壁需更换新鲜培养基延长培养时间。

• 消化传代：当mcfs细胞生长至80–90%融合度时，弃去培养基，用PBS清洗一次后加入1 ml 0.25%胰蛋白酶-EDTA，置入培养箱中消化1–2分钟，观察细胞变圆松散。

• 终止反应并回收细胞：加入等体积完全培养基终止反应，用轻拍和吹打方式使mcfs细胞脱落，转入离心管。

• 离心重悬与分瓶：1000 rpm离心5分钟后弃上清液，用完全培养基重悬细胞，按1:2或1:3比例分瓶继续培养。

mcfs细胞冻存方法

• 细胞采集：依照传代步骤收集mcfs细胞，计数后调整浓度至1×10⁶ cells/ml。

• 配置冻存液：将mcfs细胞重悬于预冷冻存液（90%完全培养基+10% DMSO）中。

• 分装标记：将细胞悬液按1 ml/管分装至冻存管内，标明细胞系名称、冻存日期和传代数。

• 程序降温保存：将mcfs细胞冻存管放入程序降温盒，于-80℃中冷冻过夜，次日转存至液氮罐中长期保存。

注意事项

• mcfs细胞所有操作必须在无菌条件下进行，推荐在Ⅱ级生物安全柜内完成。

• 细胞生长状态应每日观察，注意污染、漂浮细胞及形态变化。

• mcfs细胞在适度诱导下可向肌成纤维细胞方向转化（如加TGF-β1），常用于心脏纤维化机制研究。

• 建议mcfs细胞使用在25代以内，防止遗传漂移影响实验结果。

• mcfs细胞具良好的实验可重复性，适合建立共培养体系、疾病模型或用于药效评价平台。