
mcfs细胞(原代小鼠心肌成纤维细胞)
- 来源:心脏组织
- 细胞特征:贴壁细胞 , 成纤维细胞样
- 培养基:原代成纤维细胞专用培养基
- 其他:生长因子相关基因:TGF-β、FGF等;胶原合成相关基因:COL1A1、COL3A1
相关培养基&试剂
原代小鼠心肌成纤维细胞(Mouse Cardiac Fibroblasts, MCFs)是心脏非心肌细胞的主要构成部分,约占心脏细胞总数的60%-70%,主要来源于健康小鼠的心脏组织,尤其是心室区域。
小鼠心肌成纤维细胞通过无菌条件下的组织消化和差速贴壁法,可分离获得高纯度的成纤维细胞。刚分离的细胞多呈圆形,悬浮于培养基中,贴壁后逐渐伸展为纺锤形或星形。它们形态规则,核呈卵圆形,核仁清晰,细胞质弱碱性,增殖能力强,在体外培养中5-7天即可达融合状态,并形成交叉重叠的网状结构。小鼠心肌成纤维细胞广泛应用于心血管疾病的研究,尤其是在探索心脏纤维化机制、心肌损伤修复和药物筛选等方面,是研究心脏病理生理的重要模型和实验工具。
mcfs小鼠心肌成纤维细胞特性特征
结构支持:小鼠心肌成纤维细胞为心肌细胞提供结构支持,并形成细胞外基质,促进心脏的正常功能。
修复与再生:在心脏损伤时,小鼠心肌成纤维细胞能够产生旁分泌生长因子,促进心肌细胞的修复和再生。
转化能力:在病理状态下(如心脏压力负荷),小鼠心肌成纤维细胞可以转化为肌成纤维细胞,参与心脏的纤维化过程。
标志物表达:Vimentin、Collagen I、α-SMA(平滑肌α-肌动蛋白)。
生长因子相关基因:如TGF-β、FGF等,这些基因在心脏损伤和修复过程中发挥重要作用。
胶原合成相关基因:如COL1A1和COL3A1,这些基因编码合成胶原蛋白所需的蛋白质。
TGF-β信号通路:在心肌成纤维细胞的增殖、迁移及转化过程中起关键作用,与心脏纤维化密切相关。
Wnt/β-catenin信号通路:调控成纤维细胞的增殖和分化,在心脏压力负荷下显著上调
mcfs细胞参数表
细胞名称 | mcfs细胞(原代小鼠心肌成纤维细胞) |
英文名称 | Mouse Cardiac Fibroblasts Cells |
种属来源 | 小鼠(Mus musculus) |
组织来源 | 心脏 |
生长特性 | 贴壁生长 |
形态特征 | 长梭状或纺锤形,细胞核卵圆形,核仁明显 |
纯度 | ≥90% |
细胞直径 | 15-30 µm |
培养基 | 小鼠原代心肌成纤维细胞专用培养基 |
培养条件 | 温度:37°C,气相:95%空气 + 5% CO₂ |
换液频率 | 每2-3天更换一次培养基 |
贴壁时间 | 约30分钟开始贴壁,6小时基本贴壁完成 |
生长周期 | 5-7天内达到融合状态 |
最大密度 | 通常在80%-90%时进行传代 |
标志物 | Vimentin、Collagen I、α-SMA |
胶原合成 | 合成I型和III型胶原,主要成分占比90%以上 |
生长因子相关基因 | TGF-β、FGF等 |
胶原合成相关基因 | COL1A1、COL3A1 |
信号通路 | TGF-β信号通路、Wnt/β-catenin信号通路 |
支持作用 | 对心肌细胞提供结构支持 |
修复能力 | 在心脏损伤时产生旁分泌生长因子,促进修复 |
转化能力 | 可转化为肌成纤维细胞,参与心脏纤维化过程 |
细胞质特征 | 嗜弱碱性,具有明显的蛋白质合成与分泌活动 |
核特征 | 核大而明显,均匀分布,不聚集 |
培养教程
原代小鼠心肌成纤维细胞mcfs细胞培养教程
细胞培养接种
将MCFs细胞悬液铺板于10cm无菌培养皿中,放置于37°C、5% CO₂培养箱中静置培养。
培养90分钟后,用移液器轻轻吹打,促进未贴壁细胞脱离,并优化MCFs细胞的贴壁生长。
更换培养基:初次培养24小时后更换培养基,以去除未附着的细胞和碎片。之后每2-3天更换一次培养基,确保MCFs细胞健康生长。
传代培养
传代条件:当MCFs细胞密度达到80%-90%融合时,进行传代操作。
用PBS洗涤细胞两次后,加入0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液,消化约45-60秒,观察MCFs细胞开始收缩后终止消化。
加入新鲜培养基,轻轻吹打使细胞脱落并均匀分散。
离心重悬:用1000rpm离心3分钟,弃去上清液后以培养基重悬MCFs细胞,按比例接种于新的培养皿中。
冻存与复苏
冻存:将MCFs细胞悬液与90%培养基和10%DMSO混合,逐步降温至-80°C后转入液氮中长期保存。
复苏:将冻存的MCFs细胞快速解冻于37°C水浴中,离心去除DMSO后,按上述方法接种培养。
注意事项
操作需在无菌环境下进行,避免MCFs细胞污染。
定期观察MCFs细胞生长状态,及时更换培养基以维持活性。
建议传代次数控制在5代以内,以保证实验中MCFs细胞的稳定性和生物学特性。
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参考文献
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