小鼠心肌细胞（原代细胞）

原代小鼠心肌细胞是从实验小鼠（如C57BL/6J品系）心脏组织中分离获得的一类细胞，广泛应用于心血管疾病研究及基础生物医学领域。

小鼠心肌细胞通常来源于左心室，通过胶原酶和Dispase联合酶解技术在无菌条件下分离，能够保持来源组织的生物学特性，包括节律性搏动和特定的电生理活动。分离出的心肌细胞形态多样，呈梭形、多边形或菱形，在贴壁培养2小时后逐渐附着，并在培养12小时后开始伸出伪足，48小时后部分细胞呈掌状并出现节律性搏动。作为终末分化细胞，心肌细胞在体外不增殖，但其结构和功能特性得以维持，实验操作简便且重复性好，小鼠心肌细胞适用于心肌肥厚、信号通路、缺血预处理等基础研究，以及生物力学分析、药物筛选、安全性评价等应用。

小鼠心肌细胞特性特征

• 小鼠心肌细胞在体外不具备增殖能力，属于终末分化细胞，但能够维持其生理功能。

• 心肌细胞具有独特的电生理活动，包括动作电位的产生和传导，这对于心脏的正常功能至关重要。
  

• 原代小鼠心肌细胞表达多种与心脏发育和功能相关的基因，如肌动蛋白（Actin）、**肌球蛋白（Myosin）**等。
  

• 小鼠心肌细胞还表达一些关键的转录因子，如GATA4和NKX2-5，它们在心脏发育和功能维持中起着重要作用。

• 心肌细胞常见的标志物包括心肌特异性蛋白（如Troponin T、α-Actinin）。
  

• 信号通路：心肌细胞在响应不同刺激时涉及多个信号通路，包括TGF-β信号通路、Wnt/β-catenin信号通路等，这些通路在心脏病理状态下尤为重要

小鼠心肌细胞参数表

小鼠心肌细胞原代培养教程

小鼠心肌细胞复苏

• 解冻细胞：将装有小鼠心肌细胞的冻存管迅速置于37°C水浴中，轻轻摇晃使细胞完全融化（通常1-2分钟内完成）。

• 稀释细胞：解冻后的小鼠心肌细胞悬液转移至离心管，加入4-6 mL完全培养基，轻轻混匀。

• 离心：以1000 rpm离心3-5分钟，去除上清液。

• 重悬细胞：用完全培养基重悬小鼠心肌细胞，使细胞分散均匀。

• 接种：将细胞悬液移至T25培养瓶，加入6-8 mL完全培养基，置于37°C、5% CO₂培养箱中培养。

• 观察：次日使用显微镜检查小鼠心肌细胞贴壁情况，换新鲜培养基以去除非贴壁细胞。

小鼠心肌细胞传代

• 洗涤：弃去旧培养基，用PBS清洗小鼠心肌细胞1-2次以去除残留物和死细胞。

• 消化：加入适量胰蛋白酶-EDTA溶液（T25瓶约1-2 mL），置于37°C培养箱中消化1-2分钟，观察小鼠心肌细胞状态，细胞变圆脱落时及时终止消化。

• 终止消化：加入3-4 mL完全培养基终止酶作用，轻轻吹打使细胞完全脱离。

• 离心：以1000 rpm离心3-5分钟，弃上清液。

• 重悬和接种：用新鲜培养基重悬小鼠心肌细胞，按照1:2或1:5比例接种到新的培养瓶，加入适量完全培养基继续培养。

小鼠心肌细胞冻存

• 细胞收集：按照传代步骤收集消化后的小鼠心肌细胞，用血球计数板计数细胞数，冻存密度建议为1×10⁶至1×10⁷个活细胞/mL。

• 离心和重悬：以1000 rpm离心3-5分钟，去除上清，用冻存液重悬小鼠心肌细胞。

• 分装与标记：将小鼠心肌细胞悬液分装至冻存管，标注细胞名称、代数及冻存日期。

• 降温：将冻存管置于程序降温盒中，以-1°C/min速率降至-80°C，然后转入液氮中长期保存。

• 位置记录：记录冻存管在液氮容器中的位置，以便后续使用。