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大鼠原代心肌成纤维细胞货号:STM-CE-3303 规格:5×10⁵cells/T25细胞培养瓶

大鼠原代心肌成纤维细胞

  • 来源:心脏组织
  • 细胞特征:贴壁细胞 , 成纤维细胞样
  • 培养基:原代细胞专用培养基
  • 其他:标志性蛋白: 胶原蛋白(如COL1、COL3)、 α-SMA(平滑肌α-肌动蛋白)
价格:¥ 3,100.00

大鼠原代心肌成纤维细胞(Rat Primary Cardiac Fibroblasts)是心脏组织中最主要的非肌肉细胞类型,占心脏细胞总数的60%-70%,在心脏的发育、损伤修复和组织重塑中起关键作用。

大鼠原代心肌成纤维细胞来源于大鼠心脏组织,通常通过外科取心、酶解(如胶原酶和胰蛋白酶)以及差速贴壁法分离纯化。心肌成纤维细胞具有重要的生理功能,能够分泌胶原蛋白、弹性纤维及网状纤维,维持心脏结构稳定性,并通过旁分泌生长因子调节心肌细胞功能。当心肌受损时,成纤维细胞可重新转变为幼稚状态,恢复功能活性,参与组织修复。

大鼠原代心肌成纤维细胞特性特征

  • 心肌成纤维细胞表达多种标志性蛋白:胶原蛋白(如COL1A1、COL3A1)、α-SMA(平滑肌α-肌动蛋白)、生长因子(如TGF-β)。

  • 基因特征:大鼠心肌成纤维细胞的基因表达谱显示出与心脏发育、修复及病理变化相关的多种基因,包括调控细胞增殖、迁移及基质合成的基因。这些基因在不同的生理和病理条件下可能表现出不同的表达水平。

大鼠心肌成纤维细胞参数表

细胞名称大鼠原代心肌成纤维细胞
英文名称Rat Cardiac Fibroblast Cells
来源大鼠心脏组织(Mus musculus)
细胞形态突起的纺锤形或星形,细胞核卵圆形
纯度≥90%
细胞直径15-30 µm
核特征核大而明显,均匀分布
生长方式长梭状细胞,贴壁培养
培养基原代细胞专用培养基
培养条件温度:37°C;气相:95%空气 + 5% CO₂
换液频率每2-3天更换一次
贴壁时间约30分钟开始贴壁,6小时基本完成
生长周期通常在5-7天内达到融合状态
最大密度通常在80%-90%时进行传代
表达标志物Vimentin、胶原蛋白(COL1A1、COL3A1)
胶原合成合成I型和III型胶原,主要成分占比90%以上
生长因子基因TGF-β、FGF等
信号通路TGF-β信号通路、Wnt/β-catenin信号通路
修复能力在心脏损伤时产生旁分泌生长因子,促进修复
转化能力可转化为肌成纤维细胞,参与心脏纤维化过程
细胞质特征嗜弱碱性,具有明显的蛋白质合成与分泌活动
存储条件-80℃或液氮中长期保存
冻存保护剂DMSO(10%)与胎牛血清混合
冻存和复苏冻存后在-80℃保存,复苏时需迅速解冻于37℃水浴中
注意事项建议用多聚赖氨酸 PLL(0.1mg/ml)或明胶(0.1%)对接种培养皿包被处理

培养教程

大鼠原代心肌成纤维细胞培养教程

细胞复苏

  • 准备好37℃水浴锅。

  • 配制适合大鼠心肌细胞培养的培养基,推荐使用含10%胎牛血清(FBS)和1%青链霉素的高糖DMEM培养基。

  • 将冻存管从液氮或-80℃冰箱中取出,迅速转移至37℃水浴中摇匀解冻,通常需要1-2分钟,直至大鼠心肌细胞完全融化。

  • 将解冻后的细胞悬液转移至15 mL离心管中,加入5 mL预热的培养基以稀释DMSO。

  • 以1000 rpm离心3-5分钟,去除上清液,保留细胞沉淀。

  • 加入新鲜培养基(约5 mL)重新悬浮大鼠心肌细胞,轻轻吹打均匀。

  • 将细胞悬液接种至T-25或T-75培养瓶中,放置于37℃、5% CO₂的培养箱中培养。

  • 细胞复苏24小时后,及时更换培养基以清除未附着的大鼠心肌细胞和残余DMSO。

细胞传代

  • 当大鼠心肌细胞生长至70%-80%融合时,可以开始传代操作。

  • 用PBS洗涤培养瓶以去除残留培养基。

  • 加入适量胰蛋白酶-EDTA(0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA)消化液,置于37℃孵育约5分钟,直至大鼠心肌细胞变圆且开始脱落。

  • 加入等体积的新鲜培养基,终止胰蛋白酶的作用,并轻轻吹打以分离细胞。

  • 以1000 rpm离心5分钟,弃去上清液,重新用培养基悬浮细胞并计数。

  • 按照1×10⁵个/mL的接种密度,将大鼠心肌细胞分装至新的培养瓶中,置于培养箱中继续培养。

冻存培养

  • 使用含10% DMSO的冷冻保护剂,推荐将DMSO与胎牛血清按照9:1的比例混合制备。

  • 当大鼠心肌细胞融合至70%-80%时,按照传代步骤消化细胞并离心收集。

  • 用冷冻保护剂将大鼠心肌细胞重悬至1-2×10⁶个/mL的浓度,并轻轻混匀。

  • 每管加入1 mL细胞悬液,确保冷冻管标记清晰。

  • 使用含异丙醇的冷冻盒,缓慢降温至-80℃(每分钟降低1℃),预冷过夜后转入液氮罐中长期保存。

  • 确保冷冻和复苏过程温度变化平缓,避免冰晶损伤大鼠心肌细胞。

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