
大鼠原代心肌成纤维细胞
- 来源:心脏组织
- 细胞特征:贴壁细胞 , 成纤维细胞样
- 培养基:原代细胞专用培养基
- 其他:标志性蛋白: 胶原蛋白(如COL1、COL3)、 α-SMA(平滑肌α-肌动蛋白)
大鼠原代心肌成纤维细胞(Rat Primary Cardiac Fibroblasts)是心脏组织中最主要的非肌肉细胞类型,占心脏细胞总数的60%-70%,在心脏的发育、损伤修复和组织重塑中起关键作用。
大鼠原代心肌成纤维细胞来源于大鼠心脏组织,通常通过外科取心、酶解(如胶原酶和胰蛋白酶)以及差速贴壁法分离纯化。心肌成纤维细胞具有重要的生理功能,能够分泌胶原蛋白、弹性纤维及网状纤维,维持心脏结构稳定性,并通过旁分泌生长因子调节心肌细胞功能。当心肌受损时,成纤维细胞可重新转变为幼稚状态,恢复功能活性,参与组织修复。
大鼠原代心肌成纤维细胞特性特征
心肌成纤维细胞表达多种标志性蛋白:胶原蛋白(如COL1A1、COL3A1)、α-SMA(平滑肌α-肌动蛋白)、生长因子(如TGF-β)。
基因特征:大鼠心肌成纤维细胞的基因表达谱显示出与心脏发育、修复及病理变化相关的多种基因,包括调控细胞增殖、迁移及基质合成的基因。这些基因在不同的生理和病理条件下可能表现出不同的表达水平。
大鼠心肌成纤维细胞参数表
细胞名称 | 大鼠原代心肌成纤维细胞 |
英文名称 | Rat Cardiac Fibroblast Cells |
来源 | 大鼠心脏组织(Mus musculus) |
细胞形态 | 突起的纺锤形或星形,细胞核卵圆形 |
纯度 | ≥90% |
细胞直径 | 15-30 µm |
核特征 | 核大而明显,均匀分布 |
生长方式 | 长梭状细胞,贴壁培养 |
培养基 | 原代细胞专用培养基 |
培养条件 | 温度:37°C;气相:95%空气 + 5% CO₂ |
换液频率 | 每2-3天更换一次 |
贴壁时间 | 约30分钟开始贴壁,6小时基本完成 |
生长周期 | 通常在5-7天内达到融合状态 |
最大密度 | 通常在80%-90%时进行传代 |
表达标志物 | Vimentin、胶原蛋白(COL1A1、COL3A1) |
胶原合成 | 合成I型和III型胶原,主要成分占比90%以上 |
生长因子基因 | TGF-β、FGF等 |
信号通路 | TGF-β信号通路、Wnt/β-catenin信号通路 |
修复能力 | 在心脏损伤时产生旁分泌生长因子,促进修复 |
转化能力 | 可转化为肌成纤维细胞,参与心脏纤维化过程 |
细胞质特征 | 嗜弱碱性,具有明显的蛋白质合成与分泌活动 |
存储条件 | -80℃或液氮中长期保存 |
冻存保护剂 | DMSO(10%)与胎牛血清混合 |
冻存和复苏 | 冻存后在-80℃保存,复苏时需迅速解冻于37℃水浴中 |
注意事项 | 建议用多聚赖氨酸 PLL(0.1mg/ml)或明胶(0.1%)对接种培养皿包被处理 |
培养教程
大鼠原代心肌成纤维细胞培养教程
细胞复苏
准备好37℃水浴锅。
配制适合大鼠心肌细胞培养的培养基,推荐使用含10%胎牛血清(FBS)和1%青链霉素的高糖DMEM培养基。
将冻存管从液氮或-80℃冰箱中取出,迅速转移至37℃水浴中摇匀解冻,通常需要1-2分钟,直至大鼠心肌细胞完全融化。
将解冻后的细胞悬液转移至15 mL离心管中,加入5 mL预热的培养基以稀释DMSO。
以1000 rpm离心3-5分钟,去除上清液,保留细胞沉淀。
加入新鲜培养基(约5 mL)重新悬浮大鼠心肌细胞,轻轻吹打均匀。
将细胞悬液接种至T-25或T-75培养瓶中,放置于37℃、5% CO₂的培养箱中培养。
细胞复苏24小时后,及时更换培养基以清除未附着的大鼠心肌细胞和残余DMSO。
细胞传代
当大鼠心肌细胞生长至70%-80%融合时,可以开始传代操作。
用PBS洗涤培养瓶以去除残留培养基。
加入适量胰蛋白酶-EDTA(0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA)消化液,置于37℃孵育约5分钟,直至大鼠心肌细胞变圆且开始脱落。
加入等体积的新鲜培养基,终止胰蛋白酶的作用,并轻轻吹打以分离细胞。
以1000 rpm离心5分钟,弃去上清液,重新用培养基悬浮细胞并计数。
按照1×10⁵个/mL的接种密度,将大鼠心肌细胞分装至新的培养瓶中,置于培养箱中继续培养。
冻存培养
使用含10% DMSO的冷冻保护剂,推荐将DMSO与胎牛血清按照9:1的比例混合制备。
当大鼠心肌细胞融合至70%-80%时,按照传代步骤消化细胞并离心收集。
用冷冻保护剂将大鼠心肌细胞重悬至1-2×10⁶个/mL的浓度,并轻轻混匀。
每管加入1 mL细胞悬液,确保冷冻管标记清晰。
使用含异丙醇的冷冻盒,缓慢降温至-80℃(每分钟降低1℃),预冷过夜后转入液氮罐中长期保存。
确保冷冻和复苏过程温度变化平缓,避免冰晶损伤大鼠心肌细胞。
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