BHK-21细胞（仓鼠肾成纤维细胞）[C-13]

BHK-21细胞 [C-13]（仓鼠肾成纤维细胞）源自叙利亚仓鼠的正常肾组织，最初由I.A. Macpherson和M.G.P. Stoker于1961年建立。BHK-21细胞系的亲本来源于五只未交配的1日龄幼仓鼠，经过连续培养84天，仅在冻存保存8天时中断。通过单细胞分离技术，成功获得了第13号克隆（C-13），并发展为具有稳定特性的细胞亚系。

BHK-21细胞系具备优良的生长性能，广泛应用于病毒增殖、疫苗生产及生物医学研究，特别适合于口蹄疫病毒、脑心肌炎病毒等病毒的增殖和纯化。已被世界动物卫生组织（OIE）指定用于狂犬病的常规诊断。

BHK-21细胞为伪二倍体，主要核型为44，XY，-6，-15，6q+，15q+，四倍体发生率约为4%。大多数细胞中观察到6q+和15q+标记染色体，但偶见正常染色体单体或三体的变异情况。

BHK-21细胞特性特征

• 染色体组型：2n=44，为伪二倍体体系，四倍体发生率为4%。
  

• 核型分析：大多数细胞的核型为44, XY，且存在部分缺失（如-6, -15）和染色体标记（如6q+和15q+）。

• BHK-21细胞对多种病毒具有良好的易感性，包括：人腺病毒25、呼肠孤病毒3、水疱性口炎病毒、人脊髓灰质炎病毒2型

• 基因表达：BHK-21细胞在不同培养条件下表现出不同的基因表达特征。例如，在低血清培养基中，细胞形态会从多边形转变为延长形，并且可能出现细胞融合现象。此时，细胞会表达肌肉特异性蛋白，如：Desmin、Titin、骨骼肌肌动蛋白；这些表达变化表明BHK-21细胞在某些条件下可能具有分化潜能。

• 转染能力：BHK-21细胞被广泛用作转染宿主，逆转录酶阴性。可以用于表达含有选择和扩增标记的DNA载体。

• BHK-21细胞系在免疫反应方面相对较弱，逆转录酶阴性，使其在某些实验中成为优选的宿主

BHK-21细胞[C-13]参数表

BHK-21细胞仓鼠肾成纤维细胞培养教程

细胞复苏

• 将冷冻在液氮中的BHK21细胞管取出，立即放入38°C至40°C水浴中快速解冻（避免水进入管内并轻轻摇动）。

• 将解冻后的细胞转移至含40 mL MEM培养基和20% FBS的150 mL锥形瓶中，轻轻混匀。

• 在37℃、5% CO₂培养箱中以110 rpm摇床培养48小时，观察BHK21细胞的复苏情况。

细胞培养

• 使用含10% FBS的MEM培养基调整BHK21细胞密度至5-7 × 10⁵个/mL。

• 将培养瓶放入37℃、5% CO₂的培养箱中继续培养。

• 每2天更换一次培养基，使用同样配方的新鲜培养基。

单细胞悬浮制备

• 在复苏后的第一代BHK21细胞中计数后，使用含10% FBS的无血清培养基进行稀释，制备单细胞悬液。

• 稀释步骤：100 × 10⁴个/mL → 10 × 10⁴个/mL → 1 × 10⁴个/mL → 1 × 10³个/mL。

• 将1 × 10³个/mL的单细胞悬液吸取500 μL加入100 mL新鲜培养基中，混合均匀。

• 使用12道移液器将混合液分配到96孔板中，每孔200 μL（确保每孔接种一个细胞）。

• 在37℃、5% CO₂的条件下培养2小时后，观察各孔生长情况，标记出只有一个细胞的孔，并继续培养。

• 每天观察并记录BHK21细胞的生长情况，直到第7天挑选30株生长较快的单克隆细胞进行换液。

单克隆细胞扩大培养

• 当单克隆BHK21细胞在96孔板底部生长超过60%时进行扩大培养。

• 按以下顺序逐步传代：从96孔板转移至24孔板，再转移至T25、T75培养瓶，最后转移至150 mL锥形瓶。

• 每次传代时，待BHK21细胞生长达到90%以上时，用移液器轻轻吹打以消化并转移至下一级容器。

细胞冻存

• 当BHK21细胞达到所需密度（通常为7.5 × 10⁶个/mL）时，可以进行冻存。

• 将BHK21细胞与冻存液以1:1比例混合，并分装至冻存管中。

• 将冻存管置于-80℃冰箱中过夜，然后转移至液氮罐中保存。