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货号：STM-CE-2305 规格：5×10⁵cells/T25细胞培养瓶
小鼠原代真皮成纤维细胞（MDF细胞）
- 来源：皮肤组织
- 细胞特征：贴壁细胞 , 成纤维细胞样
- 培养基：原代 成纤维细胞专用培养基,含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
- 其他：分泌I型和III型胶原蛋白、透明质酸等成分，参与组织修复和维持皮肤结构完整性
原代小鼠真皮成纤维细胞（Mouse Dermal Fibroblasts, MDF）是从小鼠皮肤真皮组织中分离得到的重要细胞类型，广泛用于生物医学研究。其前体来源于胚胎时期中胚层的间充质细胞，通过酶消化或机械分离技术获得，常用实验小鼠品系包括C57BL/6。刚分离的细胞在培养基中呈圆形，折光性强，短时间内完成贴壁，逐渐伸展为梭形或星形；小鼠真皮成纤维细胞常用于组织工程、创伤修复、皮肤病理学和药物研发中，特别是在创伤修复研究中可评估新型材料或药物的调节作用。
小鼠原代真皮成纤维细胞特性特征
基因表达：表达多种与细胞外基质合成相关的基因，如COL1A1（I型胶原蛋白）、COL3A1（III型胶原蛋白）和HAS2（透明质酸合成酶）等。
标志物：通过免疫荧光鉴定，真皮成纤维细胞通常表达Vimentin，这是一种中间丝蛋白，是成纤维细胞的重要标志物。此外，它们不应含有HIV-1、HBV、HCV等病原体。
生长因子：在创伤愈合过程中，原代真皮成纤维细胞能够分泌多种生长因子，如转化生长因子β（TGF-β）和血小板源生长因子（PDGF），促进周围细胞的增殖和迁移
小鼠原代真皮成纤维细胞参数表
| 细胞名称 | 小鼠原代真皮成纤维细胞（MDF细胞） |
| 英文名称 | Mouse Dermal Fibroblasts from C57BL/6 |
| 组织来源 | 小鼠正常皮肤真皮组织（可选自头部、腹部、腿部等多个部位） |
| 细胞形态 | 梭形、多角形 |
| 生长方式 | 贴壁生长 |
| 传代特性 | 可传代3-5代 |
| 细胞纯度 | 经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上 |
| 生物安全等级 | BSL-1 |
| 不含病原体 | 不含HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等 |
| 培养基 | 原代细胞专用培养基,含 FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin 等 |
| 培养条件 | 95%空气，5%二氧化碳；37℃ |
| 培养瓶规格 | T25培养瓶或冻存管 |
| 细胞接种密度 | 5 × 10⁵细胞/瓶 |
| 培养基更换频率 | 每3天更换一次新培养基 |
| 发货规格 | 活细胞：T25培养瓶1瓶或1ml冻存管1支（细胞量约为5 x 10⁵ cells/vial） |
| 质量检测方法 | 经免疫荧光鉴定检测Vimentin和Fibronectin |
| 细胞用途 | 仅供科研使用 |
培养教程
小鼠原代真皮成纤维细胞培养教程
MDF细胞复苏
预热37℃水浴槽和含10%胎牛血清的DMEM培养基。
将0.2%明胶包被的培养瓶准备好，置于培养箱中平衡温度和气体环境。
从液氮罐中取出冻存的MDF细胞冻存管，立即放入37℃水浴中，快速摇动使细胞解冻（约1-2分钟）。
解冻后迅速用75%乙醇擦拭冻存管表面，移至无菌操作台内。
将细胞悬液转移到15 mL离心管中，加入5倍体积预热的DMEM培养基稀释DMSO，400 g离心5分钟，弃去上清液。
将细胞沉淀重悬于1-2 mL培养基中，接种到预包被的T25培养瓶中，并补充培养基至5 mL。
将培养瓶置于37℃、5% CO₂培养箱中培养，6小时后更换新鲜培养基去除残余DMSO。
MDF细胞传代
传代的细胞密度：当细胞融合度达到70%-80%时进行传代。
消化液：使用0.25%胰酶-EDTA（预热至37℃）。
掉旧培养基，使用PBS轻柔清洗细胞1次以去除残余血清和代谢废物。
加入适量胰酶-EDTA溶液（约1 mL/25 cm²），37℃孵育约1-2分钟，观察显微镜下细胞变圆脱离。
加入等体积含10%胎牛血清的培养基终止消化，用吸管轻轻吹打使细胞分散。
将细胞悬液转移至15 mL离心管中，400 g离心5分钟，弃上清后重悬于新鲜培养基中。
按1:3的比例接种到新的培养瓶中，并补充适量培养基后置于培养箱继续培养。
消化时间不宜过长，以防止对MDF细胞造成损伤。
每次传代后应观察细胞状态，记录贴壁时间及增殖速率，确保细胞保持良好活性。
MDF细胞冻存
收集处于对数生长期的MDF细胞，按常规方法消化并离心收集细胞沉淀。
用预冷的冻存液将细胞重悬，细胞密度调整至1×10⁶~2×10⁶个/mL。
分装细胞悬液到无菌冻存管中，每管1 mL。
将冻存管放入程序降温盒中，-80℃保存过夜后转移至液氮中长期储存。
冻存细胞时应确保冻存液与细胞混匀，避免细胞结团。
液氮储存时确保液位充足，避免因温度波动影响MDF细胞存活率。
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