
小鼠肾小球内皮细胞(原代细胞)
- 来源:小鼠肾组织
- 细胞特征:内皮细胞样;圆形、多角形;单层贴壁生长;
- 培养基:原代内皮细胞专用培养基
- 其他:作为肾小球滤过膜的第一道屏障;具有抗凝、抗血栓的作用
原代小鼠肾小球内皮细胞是从小鼠肾组织中分离得到的。
肾小球是肾脏的功能单位,起着过滤血液、生成原尿的关键作用。内皮细胞作为肾小球滤过膜的一部分,位于肾小球毛细血管壁腔侧,与血流直接接触,具有重要的保护作用,可阻止大分子物质通过,并具有抗凝、抗血栓的功能。
小鼠肾小球内皮细胞相关特性
肾小球是肾脏的功能单位,用于过滤血液生成原尿。其过滤膜包括内层、中层和外层,内层为内皮细胞层。
小鼠肾小球内皮细胞是特殊微血管类型的细胞,位于肾小球毛细血管壁腔侧,是肾小球滤过膜的第一道屏障,具有抗凝、抗血栓作用。
肾小球系膜是肾小球毛细血管袢之间的特殊间充质,由系膜细胞和系膜基质组成。系膜细胞具有活跃的功能,包括分泌细胞基质、产生细胞因子、吞噬和清除大分子物质等。
小鼠肾小球内皮细胞参数表
细胞类型 | 小鼠肾小球内皮细胞 |
分离来源 | 肾组织 |
形态特征 | 圆形、多角形;单层贴壁生长;细胞质丰富,细胞核为圆形或卵圆形 |
位置 | 肾小球毛细血管壁腔侧 |
功能 | 作为肾小球滤过膜的第一道屏 具有抗凝、抗血栓的作用 |
研究价值 | 在免疫学和病理生理学领域具有重要的研究价值 |
包被条件 | PLL(0.1mg/ml),明胶(0.1%) |
生长特性 | 贴壁 |
细胞形态 | 内皮细胞样;梭形、多角形 |
传代特性 | 可传1-2代;可传2-3代 |
消化液 | 0.25%胰蛋白酶 |
培养条件 | 气相:空气,95%;CO2,5% |
细胞鉴定 | Ⅷ因子相关抗原(Factor Ⅷ)免疫荧光染色为阳性 经鉴定细胞纯度高于90% 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌 |
培养教程
小鼠肾小球内皮细胞培养操作步骤
细胞培养环境准备
使用75%酒精消毒T25细胞培养瓶外表面,放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4小时,稳定细胞状态。
贴壁细胞消化
吸出T25细胞培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次。
添加1mL 0.25%胰蛋白酶消化液至T25培养瓶中,轻轻转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,37℃温浴1-3分钟。
倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后,再加入5mL完全培养基终止消化。
用吸管轻轻吹打混匀,按传代比例接种T25培养瓶传代,然后补充新鲜的完全培养基至5mL,置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养。
待细胞完全贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
细胞收货脱落
收集所有细胞悬液,1000rpm,离心5分钟,保留沉淀。
添加0.5mL 0.25%胰蛋白酶消化液至离心管中,重悬沉淀,放置于37℃消化3分钟。
消化完毕后向离心管内加入5mL完全培养基终止消化。
经1000rpm,离心5分钟,丢弃上清,用5mL完全培养基(补加1%FBS,促进贴壁)重悬沉淀,接种于新的培养瓶内。
待细胞完全贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基(37℃预热)。
细胞实验
若将贴壁的原代细胞转移至其他实验器皿(如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等),需要对实验器皿进行包被以增强细胞贴壁性。包被条件可选用鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2)、PLL(0.1mg/ml)、明胶(0.1%)。
注意事项
培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作。
传代培养过程中,胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
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参考文献
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