HK-2 人肾皮质近曲小管上皮细胞

HK-2人肾皮质近曲小管上皮细胞来源于正常成年男性肾脏近端肾小管细胞系。用人乳头状瘤病毒16（HPV-16）E6/E7基因转导使细胞永生化。

HK-2人肾小管细胞源自正常的人体肾脏近曲小管细胞。1994年，MJ Ryan等人首次建立了HK-2细胞系，通过将正常肾脏的近端肾小管上皮细胞暴露于含有HPV-16 E6/E7基因的重组逆转录病毒中，使细胞获得永生化能力。具体地，研究人员首先将含有HPV-16 E6/E7基因的重组逆转录病毒载体pLXSN 16 E6/E7转染外生包装细胞Psi-2，然后利用Psi-2细胞产生的病毒感染兼嗜性包装细胞系PA317，最终将PA317细胞产生的病毒颗粒导入正常的肾皮质近曲小管细胞。尽管细胞系中含有新霉素抗性基因，但并未通过G418筛选转导克隆。后续的Southern和FISH分析显示，HK-2细胞来源于单克隆。

基于Southern和FISH分析，HK-2人肾小管细胞来源于单个细胞。通过PCR测定，HK-2基因组中有E6/E7基因。该细胞系可应用于毒理学研究。

HK-2 人肾皮质近曲小管上皮细胞产品参数表

HK2人肾皮质细胞特性与功能

HK-2细胞在形态上呈现典型的上皮细胞样式，并且是贴壁生长的细胞系。该细胞系具有多种细胞特性和功能特性：

• HK-2细胞保留了良好的近端肾小管细胞表型，表现出糖转运、Na+依赖性/ phlorizin敏感糖转运和腺苷酸环化酶对甲状旁腺的反应性等功能特性。但对抗利尿激素的反应性较低。

• 在生物标志物方面，HK-2细胞阳性表达碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转肽酶、亮氨酸氨肽酶、酸性磷酸酶、细胞角蛋白、α3β1整合素和纤维连接蛋白。而因子VIII相关抗原、6.19抗原和CALLA内肽酶等标志物则为阴性。

• PCR检测证实HK-2细胞基因组中含有E6/E7基因。

• 细胞具有贴壁依赖性，不会在甲基纤维素、软琼脂或悬浮液中生长。

HK2人肾小管细胞应用领域

HK-2细胞在科学研究中被广泛应用，主要包括但不限于：

• 肾脏相关疾病的研究：HK-2细胞作为模型细胞系，用于探究肾脏疾病的发病机制、新药筛选及药物毒性评价等方面。

• 药物筛选：该细胞系可用于评估药物对肾脏细胞的影响，为药物研发提供重要参考。

• 毒理学研究：HK-2细胞可用于评估化合物对肾脏细胞的毒性，为毒理学研究提供可靠的细胞模型。

HK2人肾皮质细胞（HK-2 Renal Cortical Cells）培养步骤

细胞复苏

• 从液氮罐中取出要复苏的HK2人肾皮质细胞冻存管，迅速置于37°C水浴锅中，轻微摇晃使细胞冻存管中的培养液快速融化，最好在1分钟内完成。

• 加入9 mL完全培养基离心1,000rpm，5分钟，小心取出细胞冻存管。

• 弃去上清溶液，加入1 mL完全培养基（90% DMEM/F12+10% FBS），用移液器将HK2人肾皮质细胞吹成单个细胞悬液，轻柔吹打，将细胞悬液移至无菌细胞培养皿中，加入适量完全培养基，置于37°C、5% CO2细胞培养箱中培养。

细胞传代

• 在显微镜下观察HK2人肾皮质细胞的密度，细胞长至80%以上可以考虑传代，如细胞较稀，请及时换液。

• 用移液枪吸弃去细胞培养皿中的旧培养基，使用预热至37°C的PBS溶液洗涤细胞两次并弃去，消除血清对后续胰酶的中和作用的影响。

• 加入1-2 mL的胰酶消化细胞，轻微摇晃细胞培养皿，使胰酶完全浸润HK2人肾皮质细胞表面，在显微镜下观察细胞。待细胞回缩变圆、细胞间隙增大后，弃去胰酶，加入1-2 mL完全培养基终止消化，将细胞从培养皿表面吹下，轻柔吹打细胞形成单个细胞悬液并离心，新鲜培养基重悬后将细胞悬液混匀后分状至新的细胞培养皿，并加入适量完全培养基继续培养。

细胞冻存

• 事先配好细胞冻存液。

• 将处于对数期生长的HK2人肾皮质细胞按照细胞传代步骤进行消化，将细胞吹打成单个细胞悬液后，收集细胞至15 mL离心管中，1,000rpm离心5分钟，弃去上清，加入细胞冻存液，使用移液器吹吸混匀后，加入无菌细胞冻存管中。

• 在冻存管上标注HK2人肾皮质细胞的名称及冻存时间后，4°C放置0.5小时，-20°C放置0.5小时，-80°C过夜后，置于液氮罐中长期保存，注意做好标记。