REH细胞系（人急性非B非T淋巴细胞白血病）

Reh细胞系源自急性淋巴细胞白血病（ALL）患者的组织，呈现淋巴母细胞的形态。REH细胞是一种前体B细胞，既不属于B细胞也不属于T细胞。可用于免疫系统疾病和癌症研究。

REH细胞系特征特性

• 抗原表达：cd3a（17%）B（17%）C（20%）、CD4（15%）、CD10（55%）

• 基因表达：cd3a（17%）、B（17%）和C（20%）；CD4（15%）；CD10（55%）

• 染色体异常：常见染色体易位t(12;21)(p13;q22)，涉及ETV6和RUNX1基因

• 基因突变：可能存在与白血病相关的基因突变

REH细胞系参数表

REH人急性非B非T淋巴细胞白血病培养教程

REH细胞复苏

• 解冻培养基和血清，保持在4°C。
  

• 使用75%酒精对培养瓶及工作区进行消毒。

• 从液氮罐中取出冻存的REH细胞管，迅速放入37°C水浴中解冻，轻轻摇晃，直至完全解冻（约1-2分钟）。
  

• 用75%酒精擦拭细胞管外部。

• 将REH细胞悬液转移到15mL离心管中，加入10mL预温的RPMI-1640培养基，轻轻混匀。

• 以1000rpm离心REH细胞5分钟，弃去上清。

• 重新悬浮细胞于10mL新鲜RPMI-1640培养基中，转移至培养瓶中。

• 将培养瓶置于37°C、5% CO2的培养箱中静置2-4小时，以帮助REH细胞恢复状态。

• 使用显微镜观察REH细胞分布和状态，确保均匀分布且无污染。

REH细胞培养

• 将REH细胞悬液转移到离心管中，以1000rpm离心5分钟。
  

• 弃去上清，加入新鲜培养基重新悬浮REH细胞。

• 按需要的比例将细胞悬液分装到新的培养瓶中。

• 每2-3天更换一次培养基，保持REH细胞密度在3-6×10^5 cells/mL。

• 传代比例：1:2-1:3。

REH细胞冻存

• 将REH细胞悬液转移到离心管中，以1000rpm离心5分钟，弃去上清。
  

• 重新悬浮细胞于冻存液中（约1-2×10^6 cells/mL）。

• 分装到冻存管中，每管1mL。

• 使用程序降温盒将冻存管置于-80°C预冻过夜。

• 次日，将冻存管转移到液氮罐中长期保存。

注意事项

• 无菌操作：在整个REH细胞培养过程中，严格遵守无菌操作规程，以避免细胞污染。

• 显微镜观察：定期观察REH细胞状态，确保健康生长。

• 污染控制：如发现培养液浑浊或细胞状态异常，立即处理污染问题。

常见问题与解决方案

• 污染控制：

• 细菌和真菌：使用无菌材料，定期检查REH细胞培养液的透明度和细胞形态。

• 原虫污染：如培养液轻微浑浊，需立即处理。

  
  

• 细胞复苏：

• 解冻REH细胞：快速解冻细胞，避免长时间暴露在37°C水浴中，解冻后立即转移到预温培养基中。

• 细胞恢复：解冻后的REH细胞需要2-4小时在培养箱中恢复。

  
  

• 培养基和血清：

• 培养基：使用RPMI-1640，添加10%胎牛血清。确保培养基和血清质量稳定。

• 血清批次：不同批次的胎牛血清可能影响REH细胞生长，需进行预实验以确定最佳批次。

  
  

• 传代和细胞密度：

• 传代比例：通常为1:2-1:3，每2-3天传代一次，保持REH细胞密度在3-6×10^5 cells/mL。

• 细胞密度：高或低的REH细胞密度都会影响细胞生长。

  
  

• 环境条件：

• 温度和CO2浓度：维持37°C和5% CO2，确保培养箱稳定。

• 培养基pH值：保持在7.2-7.4之间，避免pH值过酸或过碱。

不同培养条件下的表现

• 血清浓度：

• 标准条件：10%胎牛血清支持REH细胞的良好生长。

• 低血清条件：降低血清浓度可用于研究REH细胞在营养缺乏下的应激反应。

  
  

• 培养基成分：

• 标准RPMI-1640：适合一般REH细胞培养。

• 添加细胞因子：根据实验需求，可以添加特定的细胞因子（如IL-2、IL-7）研究对REH细胞生长和分化的影响。

  
  

• 培养环境：

• 低氧环境：模拟体内微环境研究REH细胞在低氧下的特性。

• 高氧环境：高氧环境可能会导致氧化应激，对REH细胞生长有负面影响。

  
  

• 传代频率：

• 频繁传代：保持REH细胞在对数生长期，但注意避免过度传代导致细胞老化。

• 延长传代间隔：观察REH细胞在高密度下的生长特性，避免细胞过度拥挤导致死亡。