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MCF 10A细胞的推荐生长和培养条件是什么？
建议在T25烧瓶中用至少10 mL（或在T75烧瓶中15 mL）推荐的完全生长培养基开始培养MCF 10A细胞。如果使用了足够体积的培养基，则可以允许细胞恢复并不受干扰地贴壁，不必在解冻后的第二天更换新的培养基。
MCF 10A细胞作为上皮细胞群生长，最初与培养物中的一些漂浮细胞轻微贴壁。这些细胞是活的，在更换培养基时不应分离或丢弃，应通过温和的离心（125 x g，10分钟）将其保留，并添加回贴壁群体中。
密歇根癌症基金会建立了MCF 10A细胞，使其在低钙浓度的无血清培养基中生长，因此在这些条件下，培养物将不会受益于通常由血清提供的贴壁因子。推荐由Lonza/Clonetics Corporation提供的哺乳动物上皮基底培养基（MEBM）和相关添加剂培养基必须补充100ng/ml霍乱毒素（Sigma C-8052）。所需的EGF（包含在试剂盒中）不能过滤，因此在添加EGF后不应过滤完整的培养基。不使用GA-1000（庆大霉素两性霉素B溶液），而是可以使用1%的Pen/Strep溶液。
在无血清培养基中培养时，去除胰蛋白酶或用大豆胰蛋白酶抑制剂中和胰蛋白酶是重要的。通过移除培养基并用PBS冲洗单层来亚培养细胞。加入3.0 mL 0.05%胰蛋白酶-0.02%EDTA（Gibco 25300或等效物），在37°C下孵育，直到细胞聚集，通常在10-15分钟内。为了中和胰蛋白酶，加入3mL 0.1%大豆胰蛋白酶抑制剂的溶液。需要在125 x g下离心10分钟以完全除去离解剂。在完整的培养基中重新悬浮细胞颗粒，并分配到新的烧瓶中。建议传代比例为1:3至1:4。
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