
HSEC细胞(人肝窦内皮细胞永生化)
- 来源:肝窦内皮;TERT永生化
- 细胞特征:贴壁细胞 ,内皮细胞样
- 培养基:内皮细胞专用培养基
- 其他:由于缺乏细胞间连接和基底膜,HSEC-TERT细胞具有较高的通透性,适合用于研究物质在血液与肝实质之间的交换。HSEC-TERT细胞培养中有见漂浮颗粒物、漂浮细胞和部分形变细胞,来源于TERT转化和筛选过程,为正常现象,多见于永生化细胞。
HSEC-TERT人肝窦内皮细胞(Hepatic Sinusoidal Endothelial Cells, HSEC)是一种通过慢病毒携带TERT基因而实现永生化的细胞系,起源于人类正常肝脏组织中的原代肝窦内皮细胞。肝窦内皮细胞是肝脏中数量最多的非实质细胞,约占肝非实质细胞总数的70%。它们在调节血液与肝实质之间的物质交换中发挥着重要作用。
与普通毛细血管内皮细胞相比,HSEC-TERT细胞缺乏细胞间连接和基底膜,具有较高的通透性,这一特性对于肝脏的功能至关重要。在适宜的培养条件下,HSEC-TERT细胞系能够稳定传代至少20代以上,同时保留了肝窦内皮细胞的主要特性,如其独特的窗孔结构和高通透性。HSEC-TERT细胞培养中有见漂浮颗粒物、漂浮细胞和部分形变细胞,来源于TERT转化和筛选过程,为正常现象,多见于永生化细胞。
HSEC永生化细胞特性特征
高通透性:由于缺乏细胞间连接和基底膜,HSEC-TERT细胞具有较高的通透性,适合用于研究物质在血液与肝实质之间的交换。
基因表达:HSEC细胞携带TERT基因,这一基因的引入使得细胞能够逃避衰老和凋亡,保持增殖能力。
代谢特性:HSEC细胞能够合成和分泌一些肝脏特异性蛋白,如白蛋白,反映其在肝脏功能方面的特性。
HSEC人肝窦内皮细胞参数表
细胞名称 | HSEC细胞(人肝窦内皮细胞TERT永生化) |
细胞别称 | HSEC(TERT) |
来源 | 人类正常肝脏组织中的原代肝窦内皮细胞;携带TERT基因 |
细胞形态 | 内皮细胞样 |
细胞类型 | 贴壁细胞 |
生长特性 | 适应性强,能够在体外稳定增殖 |
生物安全等级 | 2 |
致瘤性 | 无致瘤性 |
培养条件 | 内皮细胞专用培养基 |
培养环境 | 37℃;5% CO2;饱和湿度 |
细胞简介 | HSEC细胞是通过慢病毒携带TERT基因而建立的永生化细胞,合适条件下至少可以稳定传代20代以上。 |
换液周期 | 每2-3天 |
培养基 | 内皮细胞专用培养基 |
传代比例 | 1:2-1:4(具体情况视细胞生长速度及密度决定) |
冻存液 | 冻存液:55%基础培养基+40% FBS+5% DMSO 温度:液氮 |
冻存规格 | 200-300万细胞/ml,1ml每管 |
细胞标志物 | 表达血管假性血友病因子(vWF)、CD31等内皮细胞特异性标志物 |
功能特性 | 能合成和分泌肝脏特异性蛋白,如白蛋白和糖原 |
高通透性特性 | 由于缺乏细胞间连接和基底膜,具有较高的通透性 |
研究领域 | 肝脏疾病机制研究、药物筛选、免疫反应研究、再生医学 适用于肝脏相关的生物学和病理学研究 用于评估药物对肝脏的代谢和毒性影响 研究肝脏内细胞间的相互作用及其对肝脏功能的影响 |
培养教程
HSEC人肝窦内皮细胞TERT永生化培养教程
培养步骤
确保所有试剂和材料在操作前均已恢复至室温,特别是用于HSEC细胞培养的试剂。
使用75%酒精消毒操作台及培养瓶外表面,确保HSEC细胞培养环境的无菌性。
小心吸尽培养瓶中的旧培养基,避免HSEC细胞干燥。
加入3-4 ml常温PBS,轻轻摇动以洗涤HSEC细胞,持续10-20秒,随后吸走PBS。
向T25瓶中加入约1 ml的0.25%胰酶,轻轻摇晃培养瓶,使胰酶均匀覆盖HSEC细胞层。
将培养瓶置于37℃培养箱中,观察HSEC细胞开始收缩和脱离培养基底。
当HSEC细胞间隙扩大且细胞尚未完全脱离时,可轻拍培养瓶助脱并加入2-3 ml完全培养基以中和胰酶作用。
轻轻混匀HSEC细胞悬液以确保均匀分布。
将HSEC细胞悬液转移至离心管,1000 rpm离心3-5分钟,弃去上清液。
在HSEC细胞沉淀中加入适量新鲜培养基,轻轻重悬HSEC细胞。
将HSEC细胞均匀分配至新的培养瓶中。
添加适量的完全培养基,确保HSEC细胞在合适的环境中生长。
将培养瓶放回37℃培养箱中,继续培养HSEC细胞。
注意事项
消化时间:不同品牌胰酶的活性可能有所不同,因此应严格控制HSEC细胞的消化时间。建议每30秒观察HSEC细胞状态,避免过度消化。
HSEC细胞状态监测:在传代和换液过程中,密切关注HSEC细胞状态,避免HSEC细胞过度聚集或大面积脱落。
培养基更换:每2-3天更换培养基,以保持HSEC细胞生长的最佳环境。
传代比例:根据HSEC细胞的生长密度和状态,通常采用1:2至1:4的传代比例。
HSEC细胞冻存:如需冻存HSEC细胞,建议使用培养基+45% FBS + 5% DMSO的冻存液。在冻存前,应确保HSEC细胞充分消化并通过离心收集。