原代大鼠肝窦内皮细胞

大鼠肝窦内皮细胞（LSECs）来源于大鼠肝脏组织。

肝窦内皮细胞（SEC）是肝脏中数量最多的非实质细胞，其位于肝窦腔与肝细胞之间，具有多项重要功能，包括物质转运、吞噬、抗原提呈以及免疫耐受等。肝窦内皮细胞SEC因其特殊的窗孔结构和高度通透性而具有快速交换分子的能力。在肝脏受到病原侵袭时，SEC的窗孔逐渐减少或消失，形成内皮下基膜，从而导致肝窦毛细血管化的过程。肝窦内皮细胞约占肝非实质细胞总数的70%，在表型和功能上与普通毛细血管内皮细胞有所不同，其间缺乏细胞间连接，通透性较高，有利于物质的交换。

大鼠肝窦内皮细胞（LSECs细胞）特征

• 肝窦内皮细胞（SEC）是肝脏中最多的非实质细胞，位于肝窦腔与肝细胞之间。

• SEC具有物质转运、吞噬、抗原提呈、免疫耐受等功能。

• SEC具有窗孔结构和高度通透性，能够快速交换各种大小分子。

• 肝在遭到病原侵袭时，肝窦内皮细胞的窗孔逐渐减少或消失，导致内皮下基膜形成，形成肝窦毛细血管化。

• 肝窦内皮细胞约占肝非实质细胞总数的70%，与普通毛细血管内皮细胞在表型、功能上有差异。

• 肝窦内皮细胞之间缺乏细胞间连接，通透性高，有利于物质交换。

大鼠肝窦内皮细胞（LSECs细胞）参数表

大鼠肝窦内皮细胞培养教程

复苏细胞

• 将含有1 mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻。

• 加入4 mL培养基混合均匀后，在1000 rpm条件下离心3分钟。

• 弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。

• 将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜）。

• 第三天换液并检查细胞密度。

细胞传代

• 当细胞密度达到80%-90%时，可进行传代培养。

• 吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次。

• 添加1 mL 0.25%胰蛋白酶消化液至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶使消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃水浴1-3分钟；在倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5 mL完全培养基终止消化。

• 用吸管轻轻吹打混匀，按1:2比例接种至新的T25培养瓶，然后补充新鲜的完全培养基至5 mL，置于37℃、5% CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养。

• 待细胞完全贴壁后进行培养观察，每2-3天换一次新鲜的完全培养基。

细胞冻存

• 当细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

• 收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4分钟，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS后进行细胞计数。

• 根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度达到5×10^6~1×10^7/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1 mL细胞悬液，并做好标识。

• 将冻存管放入-80℃冰箱，24小时后转入液氮罐储存，并记录冻存管位置以便下次取用。

培养注意事项

• 仔细阅读细胞说明书，了解细胞形态、所用培养基、血清比例和所需细胞因子等信息，确保细胞培养条件一致。

• 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，在显微镜下观察细胞状态。运输过程中由于温度变化及剧烈碰撞，部分细胞可能会破碎形成碎片，这是正常现象。观察好细胞状态后，用75%酒精消毒瓶壁，将T25瓶置于37℃培养箱中放置2-4小时。

• 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集后，900-1000 rpm离心3分钟，弃去上清。用5 mL PBS重悬细胞，再次900-1000 rpm离心3分钟，用新鲜的完全培养基重悬细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。

• 注意，运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，应换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。收到细胞后第一次传代建议按1:2传代。

• 1:2传代即一个T25瓶传至两个T25瓶或两个6 cm皿，而不是一个T25瓶传至两个10 cm皿。