Panc 10.05人胰腺癌细胞

Panc 10.05是一种人胰腺癌上皮细胞系，最初于1992年从一名患有腺癌的白人男性成年患者的胰腺中分离。与之相关的PL45细胞系也源自同一患者。两种细胞都表现出K-ras癌基因的突变。

Panc 10.05人胰腺癌细胞特性特征

• 基因突变:K-ras癌基因突变：密码子12处GGT->GAT，导致甘氨酸被天冬氨酸替代
  

• 致瘤性:Panc 10.05细胞能在裸小鼠或SCID小鼠体内形成肿瘤

• 抗原表达:MHC I类抗原：阳性、MHC II类抗原：阴性

• 蛋白表达:细胞角蛋白7（Cytokeratin 7）、细胞角蛋白18（Cytokeratin 18）

• Panc 10.05镀覆效率: 约40%
  

• 相关细胞系: PL45细胞系，源自同一患者，具有相同的K-ras突变

Panc 10.05人胰腺癌细胞参数表

Panc 10.05人胰腺癌细胞培养教程

细胞复苏

• 从液氮罐中取出冻存的PANC1005细胞小瓶，并立即在37°C水浴中快速摇动，确保在1分钟内完成解冻。
  

• 解冻后，用70%乙醇擦拭PANC1005细胞小瓶表面进行消毒。

• 将PANC1005细胞小瓶内容物转移到含有9.0 mL完全培养基的离心管中。
  

• 以125 xg离心5至7分钟以去除DMSO。

• 用推荐的完全培养基重悬PANC1005细胞沉淀。
  

• 将PANC1005细胞分配到25 cm²或75 cm²的培养瓶中。

细胞培养

• 使用RPMI-1640培养基，添加100 µg/mL胰岛素、15%胎牛血清（FBS）和1%青霉素/链霉素（P/S），适合PANC1005细胞生长。
  

• 将PANC1005细胞培养瓶置于37°C、5% CO₂的培养箱中。
  

• 每2至3天更换一次培养基，以维持PANC1005细胞的最佳生长条件。
  

细胞传代

• 推荐PANC1005细胞的传代比例为1:2至1:4。
  

• 取出并丢弃旧培养基。
  

• 用0.25% (w/v) 胰蛋白酶-0.53 mM EDTA溶液短暂冲洗PANC1005细胞层，确保去除所有含有胰蛋白酶抑制剂的血清痕迹。

• 加入2.0至3.0 mL胰蛋白酶-EDTA溶液，观察直至PANC1005细胞层分散（通常在5至15分钟内）。

• 添加6.0至8.0 mL完全培养基，通过轻轻移液吸出PANC1005细胞。

• 将适当等份的细胞悬液添加到新的培养容器中并在37°C下孵育。

细胞冻存

• 收集PANC1005细胞并用培养基重悬。
  

• 以1000 rpm离心5分钟，弃上清。

• 用冻存液（90% FBS + 10% DMSO）重悬PANC1005细胞至1×10^6 cells/mL。

• 将PANC1005细胞悬液分装至冻存管中，逐步降温至-80°C，然后转移至液氮罐中长期保存。

注意事项

• 无菌操作：所有操作均需在严格的无菌条件下进行，以防PANC1005细胞污染。

• pH值控制：在PANC1005细胞回收过程中，避免培养基碱度过高。建议在添加细胞前，将含有完全生长培养基的培养容器在培养箱中预热至少15分钟，使培养基达到正常pH值（7.0至7.6）。

• 细胞监测：定期观察、拍照，并记录PANC1005细胞生长状态。

• 检测支原体等潜在污染。

• 细胞密度：接种密度应保持在1×10^6 cells/T25培养瓶左右，以确保PANC1005细胞的良好生长。

• 细胞复苏：快速解冻PANC1005细胞并在1分钟内完成；解冻后立即用培养基稀释PANC1005细胞以减少DMSO毒性。

• 细胞冻存：使用含10% DMSO的冻存液以提高PANC1005细胞存活率；采用程序降温方式冻存PANC1005细胞。