8305C细胞（人甲状腺癌细胞系）

8305C是一种人甲状腺未分化癌细胞（anaplastic thyroid carcinoma, ATC），从一名67岁女性患者的未分化甲状腺癌原发肿瘤中分离出来。该癌组织含有残留的高分化成分，提示高分化到未分化的癌进展。

8305C细胞携带p53基因突变。序列分析证实，对肿瘤抑制基因p53、Rb、APC和MCC进行了分析，序列分析证实了p53基因密码子273的第一个碱基处的C:G到T:a转变。没有观察到肿瘤抑制基因杂合性的丧失。

8305C细胞系表现出未分化甲状腺癌的特征，包括梭形、多边形和巨细胞，并在培养过程中表现出贴壁生长，形成大的纺锤形单层。细胞倍增时间约为43小时。可用于甲状腺癌症研究。

8305C细胞特性

• 细胞来源：67岁女性患者的未分化甲状腺癌。

• 细胞类型：人甲状腺未分化癌细胞（anaplastic thyroid carcinoma, ATC）。

• 组织特点：含有残留的高分化成分，提示从高分化到未分化的癌进展。

• 分子特征：携带p53基因突变，密码子273的第一个碱基处的C到T转变；未观察到肿瘤抑制基因（p53、Rb、APC和MCC）杂合性丧失。

• 细胞形态：梭形、多边形和巨细胞，上皮细胞样。

• 生长特性：贴壁生长，大的纺锤形单层。

• 倍增时间：约43小时。

8305C细胞参数表

8305C人甲状腺癌细胞系培养

收到常温8305C细胞后的处理

• 收到常温8305C细胞后，及时拍照记录有无漏液/瓶身破损现象。

• 用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察8305C细胞状态。先不要打开培养瓶盖，将8305C细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。

• 仔细阅读8305C细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。

• 静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录8305C细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议8305C细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。

8305C细胞复苏步骤

• 将含有1mL 8305C细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。

• 在1000rpm条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。

• 将所有8305C细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。

• 第二天换液并检查8305C细胞密度。

8305C细胞传代步骤

• 吸出原培养液。

• 加入2ml左右PBS，轻轻晃动培养瓶润洗8305C细胞，吸出PBS丢弃。

• 加入1ml左右0.25%胰蛋白酶溶液（含EDTA），轻轻晃动培养瓶使之浸润所有细胞。

• 放入培养箱消化，显微镜下看到8305C细胞块中间的细胞明显变圆有间隙时可终止，全程不要拍打培养瓶。消化时间约为1~2分钟。

• 加入3ml含血清的培养基终止消化，吹打8305C细胞使之脱壁并在液体里反复吹打使细胞尽量呈单颗细胞的悬浮液。

• 收集细胞悬液离心，1200rpm/min 3分钟，离心完吸出上清丢弃。

• 加入新鲜培养基，吹打几下混匀8305C细胞即可，按比例（1:3-1:6）接种到新培养瓶，补足培养基，拧松瓶盖或使用透气瓶盖进行培养。

8305C细胞冻存步骤

• 待8305C细胞生长状态良好时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

• 1000rpm离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。

• 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80℃冰箱，至少2小时后转入液氮罐储存。记录冻存管位置以便下次拿取。