T47D细胞（人乳腺管癌细胞）

T47D人乳腺导管癌细胞系源自54岁女性患者（患有乳腺浸润性导管癌）的胸腔积液中分离的上皮细胞。T47D细胞系自1979年由I. Keydar首次分离，广泛应用于癌症研究。

T-47D细胞属于亚二倍体人类细胞系，其模式染色体数为65，出现率为50%，多倍体率为0.8%。大多数细胞含有18条标记染色体，其中7条为成对存在，而11条为单拷贝。常见的标记染色体包括t(8q14q)、t(9q17q)和t(10q17p)等。T47D细胞缺乏正常的N7、N9和N10染色体，但通常具有4个N11拷贝。染色体显带分析未显示Y染色体的存在，而双微体（DM）虽出现，但频率很低。

T47D细胞特征特性

• 雌激素受体阳性（ER+）：表达雌激素受体，对雌激素敏感。
  

• 孕酮受体阳性（PR+）：表达孕酮受体。

• 雄激素受体阳性（AR+）：表达雄激素受体。

• 糖皮质激素受体阳性：表达糖皮质激素受体。

• 降钙素表达：细胞表达降钙素及其受体。

• 催乳素表达：细胞表达催乳素。

• WNT7B癌基因表达：表达WNT7B癌基因，可能与其恶性特性相关。

• 生长特性：贴壁生长，形态为上皮细胞样。

• 致瘤性：T47D细胞能在软琼脂中形成菌落。

• 转移性：源自胸腔积液，具有转移潜能。

• 同工酶谱：AK-1，1；ES-D，2；G6PD，B；GLO-I，1-2；PGM1，1；PGM3，1

• 分化的T-47D上皮细胞含有17-β-雌二醇、其他类固醇和降钙素的细胞质连接和受体。
  

T47D细胞参数表

T-47D人乳腺管癌细胞培养教程

T-47D细胞接收后的处理

• 消毒：收到T-47D细胞后，用75%酒精消毒培养瓶外壁。

• 静置：将T25培养瓶放置在37℃的培养箱中约2-3小时。

• 检查：用4X或5X显微镜检查T-47D细胞状态，并拍摄细胞状态照片（10X、20X各2-3张）及培养瓶外观照片。若发现培养瓶破损、液体溢出或T-47D细胞污染，请及时拍照并联系供应商。

• 观察贴壁情况：在显微镜下观察T-47D细胞生长和贴壁情况。若细胞密度低于60%，则去除培养瓶中的培养基，离心回收未贴壁的T-47D细胞，重悬后加入6-8mL新配制的完全培养基继续培养。若细胞密度达到70%-80%，则进行传代处理。

T-47D细胞复苏

• 从液氮中取出T-47D细胞冻存管，迅速置于37℃水浴中摇晃解冻至冰块完全融化。

• 用75%酒精消毒冻存管外壁，并置于超净台中操作。

• 将T-47D细胞悬液转移到含9mL预热完全培养基的15mL离心管中，1000rpm离心5分钟。

• 弃去上清，加入1mL预热完全培养基重悬T-47D细胞，转移到T25培养瓶中，并补充完全培养基至5mL。

• 将T-47D细胞培养瓶置于37℃、5% CO₂培养箱中，24小时后更换新鲜培养基。

T-47D细胞传代

• 当T-47D细胞密度达到70%-80%时，准备进行传代。

• 吸去培养基，并用PBS轻轻洗涤T-47D细胞一次。

• 加入0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA溶液，37℃孵育约3-5分钟，观察T-47D细胞脱落情况。

• 加入预热的完全培养基终止消化，并轻轻吹打T-47D细胞使其完全脱落。

• 将T-47D细胞悬液转移至15mL离心管中，1000rpm离心5分钟。

• 弃去上清，加入适量完全培养基重悬T-47D细胞，按1:2至1:4比例接种到新的培养瓶中。

• 补充完全培养基至适量，将T-47D细胞培养瓶置于培养箱中继续培养。

T-47D细胞冻存

• 当T-47D细胞生长良好且密度适宜时，进行冻存。

• 吸去培养基，并用PBS轻轻洗涤T-47D细胞一次。

• 加入0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA溶液，37℃孵育约3-5分钟，观察T-47D细胞脱落情况。

• 加入预热的完全培养基终止消化，轻轻吹打T-47D细胞使其完全脱落。

• 将T-47D细胞悬液转移至15mL离心管中，1000rpm离心5分钟。

• 弃去上清，加入冻存液（90%完全培养基+10%DMSO）重悬T-47D细胞。

• 将T-47D细胞悬液分装到冻存管中，每管1mL。

• 将冻存管置于程序降温盒中，-80℃预冻过夜后转移至液氮中长期保存。

注意事项

• 传代前48小时内，T-47D细胞多为圆形发亮状态，培养基颜色变化不明显时避免移动细胞。

• 收到T-47D细胞后，运输用培养基不能再用来培养细胞，需更换新配制的完全培养基。

• 初次传代建议使用1:2比例进行。

• T-47D细胞对激素非常敏感，需注意培养过程中对雌激素和抗雌激素的反应。

常见问题

• 贴壁缓慢：T-47D细胞在传代前期贴壁和展开时间较长，需耐心观察。

• 生长速度变化：传代初期T-47D细胞生长速度可能较慢，48小时后贴壁牢固后生长加快。

• 运输影响：运输过程可能导致T-47D细胞脱落或成团，需进行离心回收。

• 培养基变化不敏感：T-47D细胞的培养基颜色变化不明显，需通过显微镜确认细胞状态。