4T1乳腺癌细胞系 （小鼠乳腺癌细胞）

4T1小鼠乳腺癌细胞在BALB/c小鼠中的肿瘤生长和转移扩散非常接近人类乳腺癌症。该肿瘤来源的细胞系是第IV阶段人类癌症的动物模型。4T1诱导的肿瘤既可用作术后模型也可用作非手术模型，因为4T1诱导肿瘤在两个模型中以相似的动力学自发转移。

4T1细胞具有致瘤性，在BALB/c小鼠中形成肿瘤和转移。

当注射到BALB/c小鼠中时，4T1细胞会自发产生高度转移的肿瘤，这些肿瘤可以转移到肺、肝、淋巴结和大脑，而原发肿瘤正在原位生长。原发性肿瘤不必切除以诱导转移性生长。

由于4T1细胞对6-硫泉碱具有耐药性，因此在许多远处器官中可以检测到微转移细胞（少至1个），其准确性比大多数肿瘤模型都高。无需对结节进行计数或对靶器官进行称重。

4T1细胞简介

• 4T1是小鼠乳腺癌细胞系，常用于研究人类乳腺癌的体外模型。

• 具有高度的侵袭性和肿瘤形成能力，常从原发肿瘤转移到其他部位。

• 适用于研究乳腺癌转移的理想选择。

4T1细胞特征

• 来源于BALB/c小鼠的自发性乳腺肿瘤，模拟人类三阴性乳腺癌。

• 4T1细胞具有高转移能力，在肺、肝、淋巴结和大脑等器官形成肿瘤。

• 建立了与人类乳腺癌Ⅵ期相似的动物模型，适用于手术后及未手术模型。

• 免疫原性低，模拟人体乳腺癌的生长和转移特性。

4T1细胞重点突出

• 4T1细胞在模拟人类乳腺癌方面具有高度的相似性。

• 适用于手术后及未手术模型的建立，以及微小转移细胞的检测。

4T1细胞参数表

4T1细胞培养日记

实验准备：

• 提前开启紫外灯照射30分钟消毒灭菌，工作台通风10分钟。

• 使用75%酒精擦拭台面，确保清洁。

器材及试剂：

• 器材：玻璃瓶、培养瓶、培养皿、巴士管、离心管、移液枪、枪头（白色0-10ul；黄色20-200ul；蓝色100-1000ul）、滤器、吸管、多孔培养皿、6cm皿、10cm皿等。

• 试剂：DMEM培养液、缓冲液、PBS、消化液、血清、抗生素。

细胞培养条件：

• 形态特征：上皮细胞样，贴壁生长。

• 培养基：90% DMEM + 10% FBS + PS。

• 生长条件：气相：95%空气 + 5%二氧化碳；温度：37°C。

• 传代方法：1:2至1:3，每周3次。

• 冻存条件：无血清冻存液（或者冷冻保存液：90%血清，10% DMSO），液氮储存。

养护注意事项：

• 运输所使用的培养基不能再次用于培养细胞，需使用新配制的完全培养基。

• 第一次传代建议1：2传代，注意1:2传代是指1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿，而非1个T25瓶传2个10cm皿。

养护操作步骤

细胞复苏：

• 在37°C水浴中快速摇晃解冻含有1 mL 4T1细胞悬液的冻存管，加入4 mL培养基混合均匀。

• 在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加入1-2 mL培养基后轻轻吹匀。

• 将所有4T1细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜。

细胞传代

• 弃去培养上清，用PBS润洗细胞1-2次。

• 加入1 mL消化液（0.25% Trypsin-0.02% EDTA）于培养瓶中，37°C培养箱中消化1-3 min。

• 观察细胞消化情况，迅速终止消化并补加2-3 mL完全培养基。

• 离心后，弃去上清液，补加1-2 mL培养基后吹匀。

• 将细胞悬液按1:2比例分到新的培养瓶中，置于培养箱中培养。

细胞冻存：

• 收集4T1细胞悬液，离心后用PBS清洗并计数。

• 根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL。

• 将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。

典型问题及解决方案：

• 细胞不长：检查培养基、操作力度和细胞密度。

• 细胞形态特征：上皮细胞样，贴壁生长。

• 使用高糖DMEM：是的，使用高糖DMEM。

• 细胞是否能成瘤：是，能在BALB/c小鼠中形成肿瘤并转移。

• 传代密度：建议在细胞生长至80%汇合度时传代。

• 出现小黑点：观察黑点形态和运动性，根据情况处理。