ncih520细胞（人肺鳞癌细胞）

NCI-H520人肺鳞癌细胞是源自男性鳞状细胞癌患者肺组织中分离出的细胞，由Gazdar AF等研究人员于1982年建立。

ncih520细胞是一种亚二倍体人类细胞系，其模式染色体数目为58，占30%。细胞中存在高倍性频率（3.2%），并具有30多条标记染色体，其中包括1q+、t（1q8q）、2q+、der（16）t（3；16）（q21；q22）、der（19）t（13；19）（q22；q13）和der（5）t（5；5）（p15pq13）等

ncih520细胞特性特征

• p53 mRNA表达：NCI-H520细胞的p53 mRNA表达水平较正常肺组织低，但没有明显的DNA结构异常

• 角蛋白和波形蛋白呈阳性表达

• 神经丝三联蛋白呈阴性表达

• ncih520细胞系可以在软琼脂中克隆（有或没有血清）。
  

• 致瘤性：在裸鼠皮下接种1×10^7个细胞后，21天内可100%形成肿瘤（5/5）

• 同工酶：AK-1，1；ES-D，1；G6PD，B；GLO-I，2；Me-2，0；PGM1，1；PGM3，1
  

ncih520细胞参数表

ncih520人肺鳞癌细胞培养教程

细胞复苏

• 准备工作：将完全培养液（90% RPMI-1640 + 10% FBS）在37℃水浴锅中预热30分钟。

• 从液氮中取出NCI-H520细胞，放入-80℃冰箱，让残余液氮挥发。

• 在超净台内，用吸管吸取6-7 mL预热的完全培养液到15 mL离心管中。

• 将NCI-H520细胞冻存管在37℃水浴锅中快速解冻（约1-2分钟），直到内容物大部分融化。

• 将解冻的NCI-H520细胞悬液转移到含有预热培养液的15 mL离心管中。

• 800-1000 rpm离心3-5分钟，弃上清。

• 用1 mL新鲜完全培养液重悬NCI-H520细胞沉淀。

• 将NCI-H520细胞悬液转移到含4 mL完全培养液的T25 cm²培养瓶（或6 cm培养皿）中。

• 将培养瓶置于37℃，5% CO₂培养箱中培养。

细胞传代

• 当NCI-H520细胞汇合度达到80-90%时进行传代。

• 弃去培养基，用PBS轻柔清洗NCI-H520细胞1-2次。

• 加入适量胰酶（0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液），37℃消化2-5分钟。

• 显微镜下观察NCI-H520细胞变圆并开始脱落时，加入含血清的完全培养基终止消化。

• 吹打NCI-H520细胞，制成单细胞悬液。

• 按1:3-1:4的比例将NCI-H520细胞接种到新的培养瓶中。

日常培养维护

• 培养条件：37℃，5% CO₂培养箱。

• 培养基：90% RPMI-1640 + 10% FBS（可根据需要添加双抗）。

• 换液频率：每2-3天更换一次培养基。

• 观察：每天观察NCI-H520细胞生长状态、形态和密度。

注意事项

• 首次传代时建议使用1:3的比例。根据NCI-H520细胞生长速度调整传代比例。

• 细胞倍增时间约为32-60小时，请根据实际生长情况安排传代时间。

• 操作过程中保持无菌操作，所有器具和试剂需提前消毒。

• 定期进行NCI-H520细胞污染检测，确保细胞质量。

冻存

• 冻存液配方：50% RPMI-1640 + 40% FBS + 10% DMSO。

• 将NCI-H520细胞悬浮在冻存液中，每管约1-2×10⁶细胞。

• 使用程序降温盒或梯度降温，最终将NCI-H520细胞保存在液氮中。

培养建议和注意事项

• 确保每天观察NCI-H520细胞形态和密度，保持细胞呈现正常的上皮细胞样、多角形形态。

• 保持适当的培养条件：37℃，5% CO₂，70-80%湿度。

• 定期更换培养基，通常每2-3天更换一次。

• 避免NCI-H520细胞过度生长，当细胞密度达到80-90%时及时传代。

传代技巧

• 首次传代建议使用1:3的比例，根据NCI-H520细胞生长速度调整传代比例。

• 避免使用运输用的灌液培养基继续培养细胞，应换用新配制的完全培养基。

• 避免NCI-H520细胞过度消化，消化时间通常为1-2分钟，观察细胞状态及时终止。

• 定期进行NCI-H520细胞污染检测，确保细胞质量。