Caki-1细胞系（人肾透明细胞癌皮肤转移细胞）

Caki-1细胞（ATCC HTB-46，RRID: CVCL_0234）是一种人肾透明细胞癌细胞系，于1971年由美国 Sloan Kettering Institute 相关研究人员 Jorgen Fogh 和 Germain Trempe 建立。caki-1细胞系取材于一名49岁白人男性肾癌患者的皮肤转移灶。Caki-1细胞的原发肿瘤来源为肾脏，实际来自皮肤转移部位，部分早期文献将其描述为肾腺癌细胞系，目前 MSK、JCRB 等资料将其归类为肾透明细胞癌细胞系。

Caki-1细胞具有典型的上皮样形态，采用贴壁方式生长。超微结构观察显示，细胞表面分布有大量微绒毛，胞质内可见少量丝状结构及较多小型线粒体，同时具有发育良好的高尔基体和内质网，并含有丰富的脂滴、多层板状结构及次级溶酶体；未发现Caki-1细胞内存在病毒颗粒。Caki-1 表达野生型 VHL 肿瘤抑制蛋白，可作为具有野生型 VHL 背景的肾透明细胞癌研究模型。Caki-1细胞具有裸鼠体内成瘤能力，形成的肿瘤表现出与肾脏原发透明细胞癌相一致的组织学特征，常用于肾癌发生发展机制、肿瘤相关基因功能、抗肿瘤药物筛选及体内移植瘤等研究。

Caki-1细胞系特性特征

• VHL 状态：Caki-1 通常被归为 VHL 野生型肾透明细胞癌细胞系，可表达 pVHL 蛋白。

• TP53 状态：研究将其归为 TP53 野生型。

• RB1 变异：Cellosaurus 收录其携带杂合错义变异 p.Leu98Pro（c.293T>C）。

• 微卫星状态：微卫星稳定型（MSS）。

• 染色体特征：非整倍体，处于近三倍体范围；染色体众数为 68，报告范围为 63～71，伴多种结构异常。

• 近端肾小管相关标志：研究检测到 NHE3、γ-谷氨酰转移酶（GGT）、二肽基肽酶 IV（DPP IV／CD26）、氨肽酶 M（APM／CD13）和碱性磷酸酶。

• 上皮极化特征：在滤膜培养条件下，可形成顶端具有微绒毛的极化单层。

• EMT 相关表达：研究检测到 E-cadherin 和 Vimentin；抑制 miR-372 后，E-cadherin 表达下降，Vimentin 表达升高。

• 缺氧应答：研究观察到缺氧条件下 HIF-1α 和 VEGF 表达增加。

• NEK1 调控：研究观察到敲低 VHL 后，Caki-1 中 NEK1 表达上调。

• p53 调控：研究观察到敲低 TGM2 或 HDM2 后，Caki-1 中 p53 阳性细胞增加。

• HLA 基因分型：已报道 HLA-A23:01／A24:02、HLA-B35:02／B44:03、HLA-C*04:01。

Caki-1细胞系（人肾透明细胞癌皮肤转移细胞）参数表

Caki-1细胞系（人肾透明细胞癌皮肤转移细胞）培养教程

Caki-1细胞复苏

• 快速解冻： 从液氮气相中取出 Caki-1细胞冻存管，立即放入 37℃水浴中轻轻晃动，使细胞快速融化，通常约 2 分钟。待冻存液基本融化后立即取出，避免长时间水浴。

• 冻存管消毒： 使用 70%乙醇擦拭或喷洒冻存管外壁，随后转入超净工作台内进行无菌操作。

• 细胞接种： 将冻存管内的 Caki-1细胞悬液转移至预先准备好的 T75 培养瓶中，加入适量完全培养基进行稀释。也可以先使用培养基稀释细胞悬液，再以约 125 × g 离心 5～10 分钟，去除含 DMSO 的上清液，最后用新鲜完全培养基重悬细胞后接种。

• 培养观察： 将培养瓶放入 37℃、5% CO₂培养箱中静置培养，观察 Caki-1细胞的贴壁及恢复情况。根据细胞状态和培养液颜色适时换液，常规培养期间建议每周换液 2～3 次。

Caki-1细胞传代

• 弃去旧培养液： 在显微镜下观察 Caki-1细胞生长情况，确认适合传代后，吸除培养瓶中的旧培养液。

• 清洗细胞： 加入少量 0.25%胰蛋白酶–0.53 mM EDTA 溶液，轻轻覆盖细胞表面进行短暂冲洗，随后吸除冲洗液，以减少残留血清对消化效果的影响。

• 酶消化： 向培养瓶中加入 2～3 mL 胰蛋白酶–EDTA 消化液，使其充分覆盖细胞层。置于显微镜下观察 Caki-1细胞的变化，通常消化约 5～15 分钟，以细胞逐渐变圆并从培养表面脱落为准。若细胞脱落较慢，可适当置于 37℃环境中促进消化。

• 终止消化： 待细胞基本脱落后，立即加入 6～8 mL 含 10% FBS 的完全培养基，终止胰蛋白酶作用。

• 收集细胞： 使用移液器轻柔吹打，使 Caki-1细胞分散并形成均匀悬液，避免过度吹打造成细胞损伤。常规传代流程无需额外离心，可直接进行后续接种。

• 分瓶培养： 根据细胞生长情况，按照 1:2～1:4 的比例将细胞悬液接种至新的培养容器中，并补充适量完全培养基。

• 继续培养： 将培养瓶放回 37℃、5% CO₂培养箱中继续培养，定期观察 Caki-1细胞的贴壁、形态及增殖情况，根据实际生长状态安排下一次传代。

Caki-1细胞冻存

• 收集细胞： 按照常规传代方法消化 Caki-1细胞，加入完全培养基终止消化，轻柔吹打形成均匀的细胞悬液。

• 细胞计数： 取适量 Caki-1细胞悬液进行计数，并采用台盼蓝染色排除法检测细胞活率。建议选择生长状态良好、活率较高的细胞进行冻存。

• 离心收集： 将细胞悬液转移至无菌离心管中，以约 100 × g 离心 5 分钟，弃去上清液，收集细胞沉淀。

• 配制冻存悬液： 使用含 5% DMSO 的冻存液轻柔重悬细胞，将活细胞浓度调整至约 2～5 × 10⁶ 个/mL，确保细胞分布均匀。

• 分装冻存： 将 Caki-1细胞悬液分装至无菌冻存管中，每管参考分装体积为 1.0～1.8 mL，并做好细胞名称、代次、冻存日期及细胞数量等标记。

• 程序降温： 将冻存管放入程序降温仪或适用的控速冻存容器中，按照约 1～3℃/分钟的速率逐步降温。使用控速冻存容器时，可先置于 -70～-90℃冰箱中过夜。

• 长期保存： 完成控速降温后，将 Caki-1细胞冻存管转移至 -130℃以下的环境中长期保存，优先选择液氮气相储存。-80℃仅作为冻存过程中的临时降温阶段，不建议作为 Caki-1细胞的长期保存条件

Caki-1细胞培养注意事项

• Caki-1细胞应使用 McCoy’s 5A Modified 培养基，而非直接将其他肾癌细胞系的培养体系套用于该细胞。

• 传代消化应以细胞实际脱落情况为判断依据，避免过度消化导致细胞活率下降。

• 复苏及传代后应及时观察 Caki-1细胞的贴壁和形态变化，发现异常时应排查培养基、血清及微生物污染等因素。

• 冻存时应特别注意 DMSO 终浓度为 5%，并尽量缩短细胞与含 DMSO 冻存液的接触时间。

• 不同来源、不同代次的 Caki-1细胞可能存在生长状态差异，建议结合实际培养表现优化传代及冻存操作。