caki-2细胞系（人肾透明细胞癌细胞系、乳头状肾细胞癌细胞）

Caki-2细胞是从一位69岁白人男性的原发性肾透明细胞癌中分离得到的。caki-2细胞系由J. Fogh分离并建立，属于原发性肾癌的另一株细胞系。

caki-2细胞染色体核型显示为低五倍体至低六倍体，存在多种异常，包括双着丝粒、端着丝粒碎片、分钟染色体、断裂和大的近着丝粒标记。
Caki-2细胞在实验条件下表现出明显的致瘤性，在裸鼠体内能够形成透明细胞癌。caki-2细胞表面的抗原显示为血型A，Rh-。Caki-2细胞表达多种同工酶如AK-1、ES-D、G6PD、GLO-I、Me-2、PGM1和PGM3。

Caki-2细胞在裸鼠正位和皮下植入形成的肿瘤表现为囊性乳头状肾细胞癌的特征。超微结构观察显示，细胞具有微绒毛和微丝结构，但线粒体含量较少。

caki-2细胞系特性

• 源自一位69岁白人男性的原发性肾透明细胞癌，是从原发性肾癌中分离的细胞系。

• 染色体异常为低五倍体至低六倍体（+A2、+A3、+B、+C、+D、+F、+G、-A），异常包括双着丝粒、端着丝粒碎片、分钟染色体、断裂和大的近着丝粒标记。

• caki-2细胞具有致瘤性，在裸鼠身上形成透明细胞癌。

• 抗原表达：血型A；Rh-。

• 同工酶：AK-1，1；ES-D，1；G6PD，B；GLO-I，1-2；Me-2，1；PGM1，1；PGM3，1。

• 超微结构特征包括微绒毛和微丝，线粒体、溶酶体或脂滴很少。

• 根据Kovacs等人的标准，最近在裸鼠正位和皮下植入形成的肿瘤被评估为囊性乳头状肾细胞癌。

caki-2细胞系参数表

caki-2人肾透明细胞癌细胞系培养

传代步骤

• 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗Caki-2细胞1-2次。

• 加入2 mL消化液（0.25% Trypsin-0.53 mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟。在显微镜下观察细胞的消化情况，待大部分细胞变圆并脱落后，迅速将培养瓶拿回操作台，轻敲几下并加入少量培养基终止消化。

• 按瓶补加6-8 mL培养基，轻轻打匀后吸出，在1000 RPM条件下离心4分钟，弃去上清液。补加1-2 mL培养液后吹匀。

• 首次传代时，将Caki-2细胞悬液按1：2的比例分到新的含6 mL培养基的培养皿或瓶中。建议冻存备份，并根据实际情况调整后续传代的分裂比例。

冻存步骤

• 细胞冻存时，弃去培养基后，用PBS清洗一遍，加入1 mL胰酶。细胞变圆脱落后，加入1 mL含血清的培养基终止消化，使用血球计数板计数。

• 在1000 RPM条件下离心4分钟，去掉上清液。加入1 mL血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，确保DMSO终浓度为5%。细胞密度不低于1x10^6/mL，每支冻存管冻存1 mL细胞悬液，注意做好标识。

• 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱至少2小时，随后转入液氮长期储存。记录冻存管位置以备取用。

解冻步骤

• 将Caki-2细胞冻存管置于37°C水浴中轻轻摇晃解冻，约2分钟。

• 解冻后立即取出冻存管，用70%乙醇消毒。此后的所有操作需在严格无菌条件下进行。

• 将解冻后的细胞内容转移到含9.0 mL完整生长基质的离心管中，以125 x g离心5-7分钟，将细胞沉淀重悬于推荐的完整生长基质中。分装至25 cm^2或75 cm^2培养瓶中，并在放入培养箱前至少15分钟将培养瓶中的完整生长基质置于孵育箱中，使培养基恢复到正常pH（7.0至7.6）。

• 在37°C条件下孵育，如使用产品说明书中描述的培养基，推荐在5% CO2的空气气氛下进行。