SK-N-BE(2)细胞（人神经母细胞瘤细胞）

SK-N-BE(2)细胞系是一种人神经母细胞瘤细胞系，于1972年从一名2岁男孩的骨髓活检样本中建立。该男孩患有扩散性神经母细胞瘤，并接受过多次化疗和放疗。SK-N-BE(2)细胞主要用于神经科学和免疫学的研究。

SK-N-BE2细胞系的模态染色体数为44，包含一条或多条携带HSR（扩增区）的染色体。SK-N-BE2细胞在培养中达到超过1 x 10^6个细胞/cm²的饱和密度。细胞形态多样化，有些细胞带有长突起，而另一些则呈现上皮样结构。细胞常常聚集形成团块并漂浮在培养基中。

SK-N-BE2细胞特性特征

• 酶活性：SK-N-BE2细胞显示中等水平的多巴胺-β-羟化酶活性

• 致瘤性：SK-N-BE2细胞在皮质化仓鼠颊囊中，107个细胞的接种物产生肿瘤的频率为18%

• 转移性：SK-N-BE2细胞具有骨髓转移能力

• 应用价值：可用于神经科学和免疫学研究、作为神经母细胞瘤研究的重要细胞模型

SK-N-BE2细胞参数表

SK-N-BE2人神经母细胞瘤细胞培养教程

复苏步骤

• 将完全培养液（DMEM/F-12，10%胎牛血清，1%双抗）放入37°C水浴中预热30分钟，以准备用于SK-N-BE2细胞的复苏。
  

• 从液氮中取出SK-N-BE2细胞的冻存管，转移至-80°C冰箱，放置数分钟以挥发残余液氮。

• 在超净台中，吸取6-7 mL完全培养液至15 mL离心管。
  

• 从-80°C冰箱中取出SK-N-BE2细胞的冻存管，轻轻甩动以去除残留干冰和液氮。

• 用镊子夹住冻存管盖子，迅速放入37°C水浴中，快速晃动约1分钟，直至SK-N-BE2细胞完全融化（注意：水浴不能淹没盖子）。

• 用酒精棉球擦拭冻存管外壁消毒，待其稍微晾干。

• 用单道移液器将融化的细胞悬液全部转入准备好的离心管中，1100 rpm室温离心4分钟以收集SK-N-BE2细胞。

• 弃去上清，用1 mL新鲜完全培养液重悬SK-N-BE2细胞，再转移至装有4 mL完全培养液的T25培养瓶中。

• 标记SK-N-BE2细胞的名称、复苏日期、代次，将其放入37°C、5% CO2饱和湿度培养箱中进行培养。

培养步骤

• 使用DMEM/F-12培养基，加入10%胎牛血清和1%双抗，专用于SK-N-BE2细胞的培养。
  

• 细胞观察：SK-N-BE2细胞的形态多样，包括长突起细胞和上皮样细胞，细胞会聚集形成团块并漂浮。

传代步骤

• 传代比例：1:2至1:3，用于SK-N-BE2细胞的传代。

• 弃去SK-N-BE2细胞的培养上清，用PBS润洗细胞1-2次。
  

• 加入0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA消化液，轻轻晃动瓶子使胰酶完全覆盖SK-N-BE2细胞。

• 将培养瓶放入培养箱中孵育1-2分钟，观察SK-N-BE2细胞是否开始脱落。

• 加入含血清的培养基以终止消化，收集SK-N-BE2细胞悬液，1100 rpm离心4分钟。

• 弃去上清，用新鲜培养基重悬SK-N-BE2细胞，按1:2至1:3比例分装到新的培养瓶中继续培养。

冻存步骤

• 冻存液：90%胎牛血清 + 10% DMSO，专用于SK-N-BE2细胞的冻存。

• 收集SK-N-BE2细胞，1100 rpm离心4分钟，弃去上清。
  

• 用冻存液重悬SK-N-BE2细胞，确保细胞密度不低于1 x 10^6细胞/mL。

• 将SK-N-BE2细胞悬液分装到冻存管中，每管1 mL。

• 逐步降温至-80°C过夜，随后转移至液氮中长期保存。

接收处理

• 收到SK-N-BE2细胞后，用75%酒精消毒瓶壁。

• 将T25瓶置于37°C培养箱中放置2-3小时，显微镜下确认SK-N-BE2细胞状态。

• 若SK-N-BE2细胞密度低于60%，收集悬浮细胞离心后用完全培养基重悬，并返回原培养瓶继续培养。

• 若SK-N-BE2细胞密度在70%-90%，则进行传代，收集培养基中的悬浮细胞，离心后回收。