
D283Med细胞系(人脑髓母细胞瘤细胞系)
- 来源:脑组织
- 细胞特征:半贴半悬,上皮细胞样
- 培养基:生长培养基:MEM(含NEAA)+10% FBS+1% P/S
- 其他:基因表达:谷氨酰胺合成酶、神经元特异性烯醇化酶阳性,但不表达胶质纤维酸性蛋白和S100蛋白。
D283 Med细胞系由Friedman等人在1985年建立,源自一名6岁患有神经管细胞瘤且有腹腔转移的白人男性小孩的腹水细胞。D283 Med细胞是一种上皮样细胞系。
D283 Med细胞系特性
源自6岁白人男性小孩的神经管细胞瘤腹水细胞和腹膜转移,用于研究人脑髓母细胞瘤。
裸鼠实验中可以形成连续移植的颅内和皮下肿瘤。
具有特定的染色体核型:45, XY, -7, -8, -17, -20, der(20)t(1;20)(q12;q13), 8q+, 17p+。
基因表达:谷氨酰胺合成酶、神经元特异性烯醇化酶阳性,但不表达胶质纤维酸性蛋白和S100蛋白。
表达SCLC(小细胞肺癌)的生化标志物:神经元特异性烯醇化酶、肌酸激酶的脑同工酶、L-DOPA脱羧酶和蛙皮素样免疫反应性
表达同工酶:AK-1, ES-D, G6PD, PGM1, PGM3。
D283 Med细胞系参数表
细胞名称 | D283Med细胞系(人脑髓母细胞瘤细胞系) |
别称 | D283 MED; D283-MED; D283_Med; D-283 Med; D-283MED; D283MED; D283Med; D283-Med; D-283; D283; Med 283; H283 |
来源 | 一名6岁患有神经管细胞瘤且有腹腔转移的白人男性小孩的腹水细胞 |
细胞形态 | 上皮样细胞 |
生长特性 | 悬浮细胞的多细胞聚集体,和一些贴壁细胞 |
倍增时间 | ~52小时 |
致瘤性 | 是,在裸鼠中形成可连续移植的颅内和皮下肿瘤 |
基因表达 | 谷氨酰胺合成酶阳性;神经元特异性烯醇化酶阳性;胶质纤维酸性蛋白阴性;S100蛋白阴性; 表达升高水平的SCLC四种生化标志物(神经元特异性烯醇化酶;肌酸激酶的脑同工酶;L-DOPA脱羧酶;蛙皮素样免疫反应性) |
同工酶 | AK-1, 1;ES-D, 1;G6PD, B;GLO-I, 2;Me-2, 0;PGM1, 1;PGM3, 1 |
细胞污染 | HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌检测阴性 |
细胞生长 | 细胞生长良好,形态正常 |
临床数据 | D283-Med细胞系由Friedman等人于1985年从恶性腹水细胞和腹膜转移中建立。 核型为45,XY,-7,-8,-17,-20,der(20)t(1;20)(q12;q13),8q+,17p+。具有5.4%的较高倍体频率。 存在三条标记染色体:der(20)t(1;20)(q12;q13)、8q+和17p+。N7、N17和N20具有单个副本。 单个X在结构上是正常的,并且通过荧光显微镜证实存在Y染色体。 |
细胞生长特性 | 悬浮聚团生长,有少数贴壁细胞 |
保藏机构 | ATCC; HTB-185 |
用途 | 研究人脑髓母细胞瘤 |
培养教程
D283Med人脑髓母细胞瘤细胞系培养
传代方法
收集细胞:
将培养瓶中的悬浮细胞收集到离心管中。
用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次,PBS润洗后细胞会脱落,PBS也要回收到离心管中。
消化细胞:
加入0.25%(w/v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2 mL,T75瓶2-3 mL),置于37°C培养箱中消化1-2分钟。
在显微镜下观察细胞消化情况,细胞大部分变圆并脱落后,轻敲培养瓶并加入3-4 mL含10% FBS的培养基来终止消化。
离心:
将收集到的悬浮细胞、PBS清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000 rpm离心5分钟,弃去上清。
重悬:
加入1-2 mL培养基重悬混匀,将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8 mL新完全培养基以保持细胞的生长活力。
后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
冻存步骤
细胞收集和消化:
按照传代过程收集和消化细胞。
使用血球计数板计数,决定细胞的冻存密度,一般为1×10^6~1×10^7个活细胞/mL。
离心和重悬:
1000 rpm离心3-5分钟,去掉上清。
用配制好的细胞冻存液重悬细胞,每1 mL冻存液含1×10^6~1×10^7个活细胞,分配到冻存管中。
冻存和储存:
标注好名称、代数、日期等信息。
将细胞置于程序降温盒中,在-80°C冰箱中过夜,然后转入液氮容器中储存。
相关资料
STR鉴定及相关
Amelogenin | X,Y |
CSF1PO | 9,12 |
D2S1338 | 17,23 |
D3S1358 | 15 |
D5S818 | 11 |
D7S820 | 10 |
D8S1179 | 12,13 |
D13S317 | 8,10 |
D16S539 | 11 |
D18S51 | 16,18 |
D19S433 | 13,14 |
D21S11 | 28,30.2 |
FGA | 20,23 |
Penta D | 9,13 |
Penta E | 7,10 |
TH01 | 7 |
TPOX | 8,11 |
vWA | 16,18 |