小鼠原代星形胶质细胞

原代小鼠星形胶质细胞（primary mouse astrocytes）是指直接从小鼠中枢神经系统组织（多取自大脑皮质或海马区域）分离获得的非永生化星形胶质细胞群体。小鼠星形胶质细胞常用于研究神经元—胶质相互作用、神经炎症反应、神经保护机制以及血脑屏障相关功能。

星形胶质细胞广泛存在于中枢神经系统的灰质和白质中，在组织结构与功能维持中具有关键作用。小鼠星形胶质细胞调控神经元外环境稳态，清除突触间隙中的谷氨酸，维持离子平衡，并通过代谢支持和营养供应促进神经元存活及突起生长。在神经损伤修复、血脑屏障的维系、局部血流调节及脑能量代谢耦合中均发挥重要作用。

小鼠原代星形胶质细胞特性特征

• 标志分子：GFAP（胶质纤维酸性蛋白）是最常用的星形胶质细胞标志物之一，S100β常作为辅助标志物；在某些实验中还可检测ALDH1L1、GLAST/EAAT1、EAAT2等转运体与受体的表达谱。

• 基因特征：属于神经胶质细胞谱系，与少突胶质细胞、室管膜细胞和小胶质细胞等共同构成中枢神经系统的胶质细胞群。在基因表达上可在炎症刺激、损伤等条件下降解或改变某些转录因子的表达，呈现功能性状态变化。

• 功能性标记与路径：参与谷氨酸清除、离子稳态维护、能量代谢耦合、细胞外基质调控、血脑屏障维持以及神经保护等多重功能。

• 结构与定位：在中枢神经系统的灰质与白质均有分布，具分支突起，广泛与神经元、血管以及其他胶质细胞相互作用。
  

主要功能：

• 维持神经元微环境的化学平衡，清除突触间隙的谷氨酸，参与钾离子缓冲。

• 提供代谢支持，向神经元供给能量与代谢底物，支持突触塑性与生长。

• 参与血脑屏障的维持与脑血流调控，参与局部能量代谢耦合。

• 在损伤与炎症时参与修复过程，形成反应性胶质细胞，调控炎性介质的产生与释放。

• 反应性与可塑性：在炎症、损伤或病理状态下，星形胶质细胞可进入反应态，表达谱及功能可能发生改变，具体亚型和状态常用于研究层面。

小鼠原代星形胶质细胞参数表

小鼠原代星形胶质细胞培养教程

复苏阶段（Thawing of 星形胶质细胞）

• 原代小鼠星形胶质细胞的复苏需严格控制时间与温度。提前预热 37 °C 水浴及完全培养基（推荐使用专用的星形胶质细胞培养基，含 10% FBS 或无血清替代系统），并准备好预包被的 T25 或 T75 培养瓶（常用 Poly-L-lysine 或 Poly-D-lysine 涂层，以增强星形胶质细胞贴壁性能）。
  

• 所有操作在超净工作台中进行，确保星形胶质细胞不受污染。

• 将冻存的星形胶质细胞从液氮罐中迅速取出，立即放入 37 °C 水浴中快速摇动 1–2 分钟，直至冰晶刚融化。

• 迅速将细胞悬液转入 9 mL 预热完全培养基中，轻柔混匀以稀释 DMSO 毒性。

• 低速离心（约 300–1 000 × g，3–5 分钟）去除上清，重悬于 1–2 mL 培养基中。

• 将星形胶质细胞悬液接种至预包被好的培养瓶中（T25 瓶约 5 mL，T75 瓶约 10 mL），确保分布均匀。

• 静置培养 24–48 小时，待星形胶质细胞逐渐贴壁后再进行首次半量换液。

复苏后观察

• 复苏后 24–72 小时内，显微镜下观察星形胶质细胞形态。贴壁早期细胞呈圆形或椭圆形，随后逐渐出现典型的星形突起。若死亡率较高或贴壁效率低，需检查冻存条件与操作速度。

• 推荐进行 GFAP 和 S100β 免疫染色，以确认星形胶质细胞身份与纯度。

传代阶段（Subculture of 星形胶质细胞）

• 当星形胶质细胞在瓶底融合度达到 80–90% 时进行传代。通常复苏后 7–10 天细胞进入稳定生长期。由于原代星形胶质细胞的表型随传代而改变，建议控制传代次数在 3–4 代以内，以保持生物学特性。
  

• 弃去旧培养基，用 PBS（无 Ca²⁺/Mg²⁺）轻轻漂洗以去除血清残留。

• 加入 0.05% 胰蛋白酶-EDTA 或 Accutase 覆盖瓶底，37 °C 下消化 1–3 分钟，期间可轻轻拍击瓶壁观察星形胶质细胞边缘收缩。

• 加入完全培养基终止消化，轻轻吹打使星形胶质细胞脱落。

• 收集悬液并离心（300 × g，5 分钟），弃上清后重悬。

• 以 1:2 至 1:3 比例分瓶接种至新涂层瓶中，确保星形胶质细胞密度均匀。

• 放入 37 °C、5% CO₂ 培养箱中培养，24 小时内减少扰动。

纯度与形态检测

• 每次传代后应通过 GFAP、S100β 、ALDH1L1 等标志物检测星形胶质细胞纯度。

• 若出现形态改变（如失去放射状突起、变为扁平形），说明星形胶质细胞可能进入反应性状态或污染其他胶质细胞，应重新优化分离或使用新批次。

冻存阶段（Cryopreservation of 星形胶质细胞）

• 选择生长状态良好、未过度融合的星形胶质细胞进行冻存。
  

• 常用冻存液为 90% FBS + 10% DMSO，或使用商业化星形胶质细胞专用冻存液。冻存前预冷并标注详细信息（细胞来源、批次号、传代次数、冻存日期等）

• 消化并收集星形胶质细胞，离心去除培养基。

• 缓慢重悬于预冷冻存液中，细胞密度约 1 × 10⁶ cells/mL。

• 分装至冻存管，每管 1 mL，密封后置于程序降温盒中（降温速率约 −1 °C/min）。

• 先放入 −80 °C 冷冻 4–6 小时，再转入液氮罐长期保存。

解冻与复苏

• 星形胶质细胞从液氮中取出后立即放入 37 °C 水浴快速融化 1–2 分钟，随后按复苏步骤重新培养。初期换液需谨慎，防止 DMSO 残留导致应激。