CTX-TNA2细胞（大鼠脑I型星形胶质细胞）

CTX-TNA2细胞系是一种源自1日龄Sprague-Dawley大鼠脑额叶皮层组织的I型星形胶质细胞，广泛应用于神经科学及生物医学研究，尤其适用于神经系统相关的基础研究和药物筛选。CTXTNA2细胞建立过程中，首先对额叶皮层组织中的I型星形胶质细胞进行原代培养；在培养3天后，使用含有鼠磷酸甘油酸激酶基因启动子的构建体和人GFAP启动子（pGFA-SV-Tt）及pPGK-neo构建体进行转染，引入带有SV40早期致癌基因的DNA。随后，通过加入G418抗生素筛选出转染成功的细胞群体，并进行克隆，最终获得稳定的细胞系。CTXTNA2细胞系具有高度特异性，来源明确，其在大鼠神经功能研究和疾病模型构建中具有重要价值。

CTX-TNA2细胞特性特征

• 来源：CTXTNA2细胞来源于1日龄Sprague-Dawley大鼠的脑额叶皮层组织中的I型星形胶质细胞。

• 转染特征：在构建过程中使用了含有鼠磷酸甘油酸激酶基因启动子的构建体，以及人GFAP启动子（pGFA-SV-Tt）和SV40致癌基因。转染后用G418进行筛选。

• 免疫反应性：约20%的细胞对胶质纤维酸性蛋白（GFAP）呈阳性反应，表明其为I型星形胶质细胞。

• CTXTNA2细胞产生的α2巨球蛋白的量与原代星形胶质细胞相似，但转铁蛋白的产生量较少。
  

• CTXTNA2细胞不产生脑啡肽原A，也不表达2型星形胶质细胞的O4或A2B5表位。

• 通过免疫染色，95%以上的细胞核中可检测到SV40 T抗原。

• 致瘤性：CTXTNA2细胞在免疫抑制小鼠中未表现出致瘤性，但能够在半固体培养基中形成克隆

CTX-TNA2细胞参数表

CTX-TNA2大鼠脑I型星形胶质细胞培养教程

培养基和冻存液的准备

• 使用DMEM作为基础培养基（推荐型号为iCell-0001），并加入10%的胎牛血清和1%的青霉素-链霉素双抗，以制备适合CTXTNA2细胞的完全培养基。
  

• 为了促进CTXTNA2细胞的正常生长，培养环境需设置为37℃，气相为空气95%和5% CO₂的平衡，湿度保持在70%-80%。
  

• 为了长期保存CTXTNA2细胞，冻存液采用90%胎牛血清与10% DMSO，推荐在冻存前现配现用，以确保细胞的高存活率。
  

CTXTNA2细胞复苏

• 将冻存的CTXTNA2细胞置于37℃水浴中快速解冻，并迅速摇晃至完全融化。
  

• 解冻后，将CTXTNA2细胞悬液转移至含4-6 mL完全培养基的离心管中，轻轻混合均匀。

• 在1000 RPM下离心3-5分钟，弃去上清液，以获得纯净的CTXTNA2细胞沉淀。
  

• 用新鲜的完全培养基重悬CTXTNA2细胞，并将其转移至含6-8 mL培养基的培养瓶中，置于37℃培养箱中过夜培养。
  

• 第二天显微镜下观察CTXTNA2细胞的贴壁情况和生长密度，以确保复苏后的细胞状态良好。
  

CTXTNA2细胞传代

• 当CTXTNA2细胞生长密度达到80%-90%时进行传代，以保持细胞的增殖活性。
  

• 弃去CTXTNA2细胞的培养上清，用无钙镁离子的PBS洗涤1-2次。
  

• 加入0.25%胰蛋白酶和0.53 mM EDTA（T25瓶使用1-2 mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟。

• 当CTXTNA2细胞大部分变圆并脱落时，立即加入3-4 mL含10% FBS的培养基终止消化。

• 将消化后的CTXTNA2细胞悬液在1000 RPM下离心3-5分钟，弃去上清。
  

• 重悬后按1:2的比例分装至新T25瓶中，加入6-8 mL新鲜培养基。

CTXTNA2细胞冻存

• 收集传代过程中消化好的CTXTNA2细胞至离心管中，计数后确保冻存密度为1×10⁶至1×10⁷个活细胞/mL。
  

• 在1000 RPM离心3-5分钟，去掉上清液。
  

• 用配制好的冻存液重悬CTXTNA2细胞，按每1 mL冻存液含1×10⁶至1×10⁷个CTXTNA2细胞的比例分装至冻存管中。

• 将冻存管置于程序降温盒中，先在-80℃冰箱中保存一夜，再转入液氮中长期储存，以确保CTXTNA2细胞的冻存效果。