
hcmec/d3细胞(人脑微血管内皮细胞)
- 来源:大脑微血管
- 细胞特征:贴壁细胞 ,纺锤形细胞
- 培养基:生长培养基:hCMEC/D3 细胞专用培养基
- 其他:hCMEC/D3细胞表达多种血脑屏障标志物,如CD34、CD31、CD40、CD105和CD144。
hcmec/d3细胞系源自人类颞叶微血管(癫痫手术中切除的组织)。
hcmec/d3细胞特性
hcmec/d3细胞系通过慢病毒载体转导与人端粒酶催化亚基(hTERT)和SV40大T抗原连续永生化。
hcmec/d3细胞通过有限稀释克隆选择性分离CEC,经鉴定hCMEC/D3细胞系特定表型特征与脑内皮细胞(Cerebral Endothelial Cell, CEC)相符。
hcmec/d3细胞系是一种稳定、易于生长的血脑屏障(BBB)模型。
hcmec/d3细胞适用于药物摄取和主动转运研究,以及了解大脑内皮细胞对不同病原体和炎症刺激的反应。
hcmec/d3细胞表达多种血脑屏障标志物,如CD34、CD31、CD40、CD105和CD144。
hcmec/d3细胞可用于研究中枢神经系统(CNS)病理学、药物转运机制、神经毒性和神经系统细胞与分子机制。
hcmec/d3细胞参数表
细胞名称 | hcmec/d3细胞(人脑微血管内皮细胞) |
细胞简称 | HCMEC/D3;hcmecd3 |
种属来源 | 人类 |
组织来源 | 颞叶微血管,从癫痫手术中切除的组织分离 |
细胞形态 | 上皮细胞样,细长型 |
生长特性 | 贴壁生长,形成毛细血管样结构 |
主要分离物 | 脑内皮细胞(CECs) |
冻存液 | 90% FBS,10% DMSO 或非程序冻存液 |
培养基础 | 永生化人脑微血管内皮细胞基础培养基 |
培养条件 | 气相:95% 空气,5% 二氧化碳;温度:37摄氏度,湿度70%-80% |
培养周期 | 传代比例:1:2-1:4,每2-3天换液一次 |
生长因子 | 内皮细胞生长因子(EGF)+ 5% FBS |
生长倍增时间 | 每周2至3次 |
表型鉴定 | 鉴定为脑内皮细胞表型 |
质控 | 细菌、真菌、支原体检测均为阴性 |
用途 | 仅限科学研究,不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用 |
应用 | 神经科学、神经退行性疾病、药物转运机制、神经毒性和细胞分子研究等 |
冻存条件 | 60% 基础培养基 + 30% FBS + 10% DMSO,液氮储存 |
保藏机构 | BCRJ 0401 |
培养教程
hcmec/d3人脑微血管内皮细胞培养
细胞复苏过程
快速将冻存管放入37°C水浴中,摇动直至完全解冻(<1分钟)。
将解冻后的细胞转移至预先加热至37°C的离心管中,含有3 mL完全培养基。
在1000 rpm下离心5分钟,去除上清液。
使用新的完全培养基完全重悬细胞,确保细胞单个化,并将其接种到10cm培养皿中。
培养过夜,并在第二天进行液体更换并检查细胞密度。
细胞冻存过程
配置冻存液为血清:二甲基亚砜(DMSO)= 9:1的比例。
取长势良好、无细菌污染的hCMEC/D3细胞,汇合度达80%-90%。
使用含0.25% EDTA的胰蛋白酶溶液消化细胞(1-2分钟),并用完全培养基终止消化。
将细胞以1.5 mL冻存液重悬,并转移至预标记好的冻存管中。
标记好细胞种类、日期和操作者信息,并放入梯度冻存盒中。
置于-80°C冰箱中快速冷冻。
细胞传代过程
当hCMEC/D3细胞汇合达到80%时,丢弃旧的培养基。
用PBS润洗细胞两次,每次使用2 mL。
使用1 mL含0.25% EDTA的胰蛋白酶溶液消化细胞,放入培养箱中1-2分钟直至细胞圆形化。
使用1 mL完全培养基终止消化,用九宫格法将细胞吹落并收集至离心管中。
以800-1000 rpm室温离心5分钟,去除上清液。
使用2-3 mL完全培养基重悬细胞,确保细胞沉淀为单个状态。
将细胞以“Z”字形播撒至预先加入7 mL培养基的10cm培养皿中。
轻柔十字交错晃动并静置数分钟,然后放入37°C培养箱中培养。
相关资料
STR鉴定及相关
Amelogenin | X |
CSF1PO | 10,12 |
D1S1656 | 15.3,17.3 |
D2S441 | 13 |
D2S1338 | 16,20 |
D3S1358 | 16,17 |
D5S818 | 11 |
D7S820 | 10,12 |
D8S1179 | 15,16 |
D10S1248 | 14,15 |
D12S391 | 19.3,22 |
D13S317 | 11,14 |
D16S539 | 9,12 |
D18S51 | 12,19 |
D21S11 | 30,32.2 |
D22S1045 | 11,15 |
FGA | 22,26 |
Penta D | 10,12 |
Penta E | 5,10 |
TH01 | 7,9 |
TPOX | 10,11 |
vWA | 14,17 |