小鼠原代脑微血管内皮细胞

脑微血管内皮细胞（BMVECs）是血脑屏障（BBB）的主要组成部分，负责限制可溶性物质和细胞从血液进入大脑。

小鼠脑微血管内皮细胞（Mouse Brain Microvascular Endothelial Cells, mBMVECs）是研究血脑屏障（BBB）和脑血管疾病的重要模型，属于内皮细胞，位于脑微血管的内壁，形成一层单层细胞层。
小鼠脑微血管内皮细胞来源于小鼠脑组织的微血管，主要通过机械切割和酶解等方法进行分离和纯化。
小鼠脑微血管内皮细胞在调节物质和细胞跨越血脑屏障发挥关键作用，保护脑组织的内环境稳定。

小鼠脑微血管内皮细胞特性

• 紧密连接（Tight Junctions）：小鼠脑微血管内皮细胞通过紧密连接蛋白（如occludin、claudin-5和ZO-1）形成高选择性的屏障，产生高跨内皮电阻（TEER），有效防止物质和离子通过细胞旁路径渗透。

• 低胞饮水平（Low Transcytosis）：与其他类型的内皮细胞不同，小鼠脑微血管内皮细胞的液相胞饮水平较低，进一步增强了其屏障功能，减少了大分子物质通过细胞穿过的可能性。

• 缺乏窗孔结构（Lack of Fenestrations）：小鼠脑微血管内皮细胞缺乏典型的内皮细胞窗孔结构，有助于维持血脑屏障的完整性，阻止血液中的大分子和细胞自由进入脑组织。

• 两极分化（Polarity）：具有不对称定位的酶和转运蛋白，表现出两极分化现象。

• 细胞粘附分子（Cell Adhesion Molecules）：小鼠脑微血管内皮细胞表面表达多种细胞粘附分子（如ICAM-1、VCAM-1），这些分子在调控白细胞跨越血脑屏障和炎症反应中有重要作用。

• 生物活性物质分泌（Secretion of Bioactive Substances）：小鼠脑微血管内皮细胞分泌多种生物活性物质，包括一氧化氮（NO）、内皮素（ET）和前列腺素（PGs），这些物质在调节血管张力、血流动力学和抗血栓形成中发挥重要作用。

小鼠脑微血管内皮细胞参数表

小鼠脑微血管内皮细胞培养

培养基和培养条件：

• 小鼠脑微血管内皮细胞完全培养基

• 传代比例为1:2，每2-3天换液一次

培养步骤：

取材处理：

• 使用C57小鼠，颈椎脱臼后处死。

• 将小鼠浸泡于75%乙醇中消毒3-5分钟，然后取出置于玻璃培养皿中。

• 打开颅腔，去除小脑和间脑，保留大脑皮质。

大脑处理：

• 将大脑半球在干滤纸上滚动以吸除软脑膜及脑膜大血管。

• 将大脑置于含冷D-Hanks'液的玻璃培养皿中，用细解剖镊去除大脑白质、残余大血管和软脑膜。

消化和纯化：

• 用D-Hanks'液漂洗3次后，加入1 ml DMEM培养液，将大脑剪碎成1 mm³大小。

• 加入0.1%Ⅱ型胶原酶（含30 U/ml DNase I，1 ml/大脑）混匀，37℃水浴消化1.5小时。

• 离心去除上清液，加入20% BSA悬浮混匀后再次离心，去除中上层神经组织及大血管，保留底部沉淀。

细胞处理：

• 加入3 ml 2.5%胰酶消化液消化20分钟，加入含血清培养基终止消化，离心去除上清液。

• 加入2 ml DMEM培养液悬浮后，铺于离心形成连续梯度的12 ml 50% Percoll，离心分离出微血管段。

• 使用DMEM漂洗两次，去除上清液。

培养：

• 将分离纯化的微血管段加入DMEM完全培养液（含20% FBS），接种于涂布基质的35 mm一次性塑料培养皿。

• 置于37℃，5% CO₂培养箱内静置培养。

• 12-24小时后换液，并加入1 ng/ml碱性成纤维细胞生长因子（bFGF），隔天换液。