shp77细胞（人小细胞肺癌细胞系）

SHP-77细胞系来源于1977年一名54岁白人男性的左肺上叶顶端的非包膜原发性肺肿瘤。shp77细胞系从小细胞肺癌组织中分离出来，保留了小细胞肺癌的关键特征，同时具有未分化大细胞变体的形态。SHP-77细胞呈上皮细胞形态，主要表现为圆形或椭圆形，具备一定的贴壁生长特性，但也能以悬浮方式生长。SHP-77细胞具有腺体形成和胞浆内板层体的存在，进一步体现其神经内分泌特征。

shp77细胞特征特性

• shp77细胞保留了小细胞肺癌的典型特征，具有稳定的生物化学特性，可连续培养，是小细胞肺癌中一种不常见的未分化大细胞突变体

• shp77细胞具有成瘤性，能在无胸腺裸鼠和M-NSG小鼠体内形成局限性结节肿瘤，无转移证据

• 神经内分泌特征：表达神经内分泌标记物L-多巴脱羧酶；具有致密核心分泌颗粒（dense core secretory granules）；

• 抗原表达：血型：O型血，Rh+；表达CD56和CD57（HNK-1，Leu-7）

• 基因表达：表达神经细胞粘附分子NKH-1

• shp77细胞可作为51Cr和111In释放细胞毒性测定的体外靶点，shp77细胞用于评估癌症患者细胞和血清的免疫反应性

• shp77细胞适用于评估接受放疗或化疗的小细胞肺癌患者的免疫状态

shp77细胞参数表

shp77人小细胞肺癌细胞系培养教程

SHP-77细胞复苏

• 从液氮中快速取出冻存的SHP-77细胞，立即放入37℃水浴中，轻轻摇动冻存管，使SHP-77细胞在1-2分钟内完全解冻。

• 解冻后，用75%酒精消毒冻存管外表面。

• 将SHP-77细胞悬液转移到15 ml离心管中，加入5 ml预热的完全培养基（RPMI-1640 + 10% FBS + 1% P/S）。

• 以1000 rpm离心5分钟，去除上清液。

• 用新鲜的完全培养基悬浮SHP-77细胞沉淀，并将其转移到培养瓶中。

• 将培养瓶置于37℃、5% CO2培养箱中培养SHP-77细胞。

SHP-77细胞传代

• 每天观察SHP-77细胞的生长状态，当SHP-77细胞密度达到80-90%时进行传代。

• 去除旧培养基，并用无钙镁的PBS洗涤SHP-77细胞。

• 加入0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液（1-2 ml），在37℃下孵育2-5分钟，轻敲培养瓶底部，直至SHP-77细胞脱落。

• 加入5-10 ml完全培养基中和胰蛋白酶，轻轻吹打SHP-77细胞使其完全悬浮。

• 将细胞悬液转移到15 ml离心管中，以1000 rpm离心5分钟，弃去上清。

• 用完全培养基重新悬浮SHP-77细胞，并按1:2到1:3的比例进行传代。

SHP-77细胞冻存

• 传代前一天，确保SHP-77细胞处于对数生长期。

• 按照传代步骤收集SHP-77细胞，并以1000 rpm离心5分钟，弃去上清。

• 用预冷的冻存液重新悬浮SHP-77细胞，调整细胞密度为1x10^6细胞/ml。

• 将SHP-77细胞悬液分装到冻存管中，每管1 ml。

• 将冻存管置于程序降温盒中，在-80℃冻存过夜。

• 次日将冻存管转移到液氮中长期保存SHP-77细胞。

培养过程中的注意细节

• 培养基选择：使用RPMI-1640培养基，添加10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素，适合SHP-77细胞生长。

• 培养条件：保持37℃，5% CO2，95%空气的培养环境，以维持SHP-77细胞的正常生长。

• 生长方式：SHP-77细胞是混合生长方式，包括悬浮和贴壁细胞。因此，传代时需要注意收集两种SHP-77细胞。

• 传代频率：根据SHP-77细胞生长状态，通常每4-6天进行一次传代。

• 无菌操作：严格遵守无菌操作规程，避免SHP-77细胞污染。

• 细胞密度：保持适当的SHP-77细胞密度，避免过度生长或密度过低。

• 定期观察：每天观察SHP-77细胞形态和生长状态，及时发现问题。

常见问题和解决方案

• 细胞生长缓慢：可能由于培养基营养不足、细胞密度过低或培养条件不适。解决方法包括更换新鲜培养基、调整SHP-77细胞密度和检查培养环境。

• 细胞污染：常见污染包括细菌或真菌。预防措施包括严格无菌操作和定期更换抗生素。一旦发现污染，应立即丢弃受污染的SHP-77细胞。

• 细胞形态异常：可能是传代次数过多、培养条件不适或细胞应激导致。解决方法包括使用低代次SHP-77细胞、优化培养条件和减少细胞应激。

• 贴壁细胞比例变化：由于SHP-77细胞是混合生长方式，传代时应保持贴壁和悬浮SHP-77细胞的平衡。

• 细胞冻存和复苏问题：可能出现细胞存活率低的问题。确保使用正确的冻存液配方（95%完全培养基，5%DMSO）和适当的冻存、复苏程序。

• STR位点变异：长期培养可能导致STR位点发生变化。定期进行STR鉴定以确保SHP-77细胞系的一致性和可靠性。