VCaP细胞（人前列腺癌细胞株）

VCaP细胞系是从一位59岁白人男性前列腺癌患者的腰椎转移病灶中获得的上皮细胞。该细胞系于1997年在美国建立，来源于一名对激素治疗不敏感的前列腺癌患者。VCaP细胞能够在裸小鼠和SCID小鼠中形成肿瘤，显示出其致瘤性，并且具有椎体转移的能力。

VCaP细胞特性特征

分子特征

• 雄激素受体(AR)：高度表达
  

• 前列腺特异抗原(PSA)：表达

• TMPRSS2-ERG融合基因：是唯一表达此融合基因的前列腺癌细胞系

抗原表达

• 细胞角蛋白-18：表达

• p53抗原：表达

• 前列腺特异性抗原(PSA)：表达

• 前列腺酸性磷酸酶(PAP)：表达

• Rb蛋白：表达

• 雄激素受体剪接变体AR-V7：表达；

其他特征

• 基因特征：TMPRSS2-ERG融合存在；可能存在AR基因扩增；

• 对激素反应：VCaP细胞对雄性激素敏感（体内和体外均表现）

• 病毒相关：产生小鼠异种性逆转录病毒Bxv-1（可能在小鼠异向移植过程中获得）
  

VCaP细胞参数表

VCaP人前列腺癌细胞株培养教程

VCaP细胞复苏

• 准备工作：从液氮中取出VCaP细胞冻存管，迅速放入37°C水浴中解冻，轻轻摇动约1-2分钟，直到VCaP细胞完全解冻。

• 转移细胞：用70%乙醇消毒冻存管外表面。在无菌条件下打开冻存管，将VCaP细胞悬液转移到含有9 mL预热培养基的15 mL离心管中。

• 离心：以1000 rpm离心5分钟，弃去上清液以去除解冻过程中产生的碎片。

• 重悬：加入10 mL预热的培养基，轻轻吹打以重悬VCaP细胞。

• 接种：将VCaP细胞悬液转移到T25培养瓶中，放入培养箱中培养。

VCaP细胞传代

• 观察细胞：当VCaP细胞达到80-90%融合时，进行传代以防止过度融合。

• 准备工作：预热培养基和胰酶消化液（0.25% Trypsin-0.53 mM EDTA），以便于消化VCaP细胞。

• 弃去旧培养基：在无菌条件下，弃去培养瓶中的旧培养基，用PBS缓冲液轻轻洗涤VCaP细胞一次。

• 消化细胞：加入适量的胰酶消化液（覆盖细胞层），在37°C下消化1-2分钟，观察VCaP细胞变圆和脱落。

• 终止消化：加入2倍体积的培养基终止消化，轻轻吹打使VCaP细胞完全脱落。

• 离心和重悬：将VCaP细胞悬液转移到15 mL离心管中，以1000 rpm离心5分钟，弃去上清液。加入预热的培养基重悬VCaP细胞。

• 接种：按1:3-1:4的比例将VCaP细胞悬液接种到新的培养瓶中，加入适量培养基，放入培养箱中培养。

VCaP细胞冻存

• 准备工作：预备冻存液：90% FBS + 10% DMSO，确保VCaP细胞在冻存过程中的存活率。

• 收集细胞：按照传代步骤消化VCaP细胞，离心后弃去上清液。

• 重悬细胞：加入预冷的冻存液重悬VCaP细胞（每冻存管1×10^6 cells/mL）。

• 分装：将VCaP细胞悬液分装到冻存管中，每管1 mL。

• 程序降温：将冻存管放入程序降温盒中，-1°C/min降温至-80°C，24小时后转移到液氮中长期保存VCaP细胞。

注意事项

• 无菌操作：整个过程必须在无菌条件下进行，使用生物安全柜来保护VCaP细胞和操作人员。

• 细胞观察：定期观察VCaP细胞形态和生长情况，及时传代，避免过度融合。

• 安全性：操作VCaP细胞时需注意其潜在的生物危害性，遵循二级生物安全操作规范。

VCaP细胞培养基组成对细胞生长的影响

• 基础培养基：高糖DMEM是VCaP细胞生长的理想选择，提供必要的营养物质。

• 血清补充：10% FBS对VCaP细胞的生长至关重要，提供生长因子和激素。

• 抗生素：青霉素-链霉素用于防止细菌污染，确保VCaP细胞在无菌条件下生长。

VCaP细胞在不同培养条件下的表现差异

• 温度和气相条件：VCaP细胞需要在37°C，95%空气和5%二氧化碳的环境中培养。偏离这些条件可能影响VCaP细胞的生长速度和代谢活性。

• 生长特性：VCaP细胞是贴壁生长的细胞，需要适当的培养表面。不同的培养表面处理可能影响VCaP细胞的贴壁效率和生长状态。

• 生长速度：VCaP细胞的倍增时间约为53小时，比许多其他细胞系生长更慢，可能需要更长的培养时间和更频繁的培养基更换。

• 密度依赖性：VCaP细胞的接种密度和维持密度对其生长有重要影响。建议的接种密度为2万-4万活细胞/平方厘米，维持密度为10万-20万活细胞/平方厘米。

• 激素敏感性：VCaP细胞对雄性激素敏感，培养基中激素水平的变化可能显著影响VCaP细胞的生长和表型。

• 传代频率：由于生长较慢，VCaP细胞通常每周需要传代2次，传代比例为1:3-1:4。不当的传代频率可能影响VCaP细胞的生长状态和实验结果的一致性。