WPMY-1细胞（人正常前列腺基质永生化细胞）

WPMY-1细胞是一种永生化的人类前列腺基质肌成纤维细胞系，于1992年从一位54岁白人男性供体的前列腺组织中分离。WPMY-1细胞源自前列腺外周区的基质，与来自相同组织区域的RWPE-1前列腺上皮细胞系一起，为研究基质-上皮相互作用提供了宝贵的模型。

WPMY-1细胞通过使用pRSTV质粒载体引入SV40大T抗原基因实现永生化，使其能够无限增殖。WPMY-1细胞系的第66代细胞大多在58至68范围内，X、 -Y。表现出良好的稳定性。

WPMY-1细胞特征特性

• wpmy-1细胞在软琼脂中具有非锚定依赖性生长能力，菌落形成效率(CFE)为0.7%

• wpmy-1细胞同时表达平滑肌α-肌动蛋白和波形蛋白、表达雄激素受体、表达SV40大T抗原、p53和pRb表达不均一

• 基因表达：表达纤维连接蛋白基因

• 抗原表达：表达激肽释放酶3 (KLK3，又称前列腺特异性抗原PSA)

• 同工酶表达：AK-1，1；ES-D，2；G6PD，B；GLO-I，1-2；Me-2，0；PGM1，2；PGM3，1

• wpmy-1细胞对合成雄激素miboleron有反应，可刺激生长至对照组的145%
  

• 血小板源性生长因子BB、表皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子(10 ng/ml)可分别刺激生长至对照组的138%、143%和146%

• 转化生长因子-β(10 ng/ml)可抑制血清诱导的生长至对照组的65%，抑制bFGF诱导的生长至对照组的30%

• 致瘤性：wpmy-1细胞在裸小鼠皮下注射时不形成肿瘤（通道22）

• 分泌极低水平的MMP-9，但高水平的MMP-2（显著高于上皮细胞）

WPMY-1细胞参数表

WPMY-1人正常前列腺基质永生化细胞培养教程

WPMY-1细胞复苏

• 从液氮中取出WPMY-1细胞，迅速置于37°C水浴中融化（约1-2分钟）。

• 将WPMY-1细胞悬液转移到含10 mL预热完全培养基的离心管中。

• 以1000 rpm离心5分钟，弃去上清液。

• 用新鲜的完全培养基重悬WPMY-1细胞，然后转移到培养瓶中。

• 将培养瓶置于37°C、5% CO2培养箱中培养WPMY-1细胞。

WPMY-1细胞日常培养

• 每2-3天更换一次WPMY-1细胞的培养基。

• 观察WPMY-1细胞的生长状态，当细胞密度达到80-90%时进行传代。

WPMY-1细胞传代

• 吸出WPMY-1细胞的培养基。

• 用不含Ca2+、Mg2+的PBS轻轻冲洗WPMY-1细胞1-2次。

• 加入适量0.25% 胰蛋白酶-0.53 mM EDTA消化液，37°C消化2-5分钟。

• 显微镜下观察WPMY-1细胞变圆并开始脱落时，轻拍培养瓶。

• 加入含血清的完全培养基终止消化。

• 吹打WPMY-1细胞，制成单细胞悬液。

• 按1:2或1:3的比例接种到新的培养瓶中。

• 补加完全培养基至适当体积。

WPMY-1细胞冻存

• 制备WPMY-1细胞冻存液：55% 基础培养基 + 40% FBS + 5% DMSO。

• 收集对数生长期的WPMY-1细胞。

• 以1000 rpm离心5分钟，弃去上清液。

• 用预冷的冻存液重悬WPMY-1细胞，调整细胞密度至1-2×10⁶/mL。

• 将WPMY-1细胞悬液分装到冻存管中（1 mL/管）。

• 将冻存管置于程序降温盒中，-80°C冰箱中降温24小时。

• 转入液氮中长期保存WPMY-1细胞。

注意事项

• 操作过程中保持无菌操作以避免WPMY-1细胞污染。

• 避免WPMY-1细胞过度消化。

• 定期检查WPMY-1细胞是否有污染。

• 建议使用低代次（10代以内）的WPMY-1细胞进行实验。

• 首次传代建议1:2比例，之后可根据WPMY-1细胞生长状况调整传代比例。

WPMY-1细胞对不同培养条件的表现

• 雄激素miboleron：可刺激WPMY-1细胞生长至对照组的145%。

• 生长因子：PDGF-BB、EGF和bFGF在10 ng/mL浓度下分别可刺激WPMY-1细胞生长至对照组的138%、143%和146%。

• TGF-β：在10 ng/mL浓度下可抑制血清诱导的WPMY-1细胞生长至对照组的65%，抑制bFGF诱导的生长至对照组的30%。

• 非锚定依赖性生长能力：WPMY-1细胞在软琼脂中的菌落形成效率(CFE)为0.7%。

WPMY-1细胞的污染检测方法

• 支原体检测：常用PCR检测WPMY-1细胞。

• 细菌检测：通过显微镜观察和培养法检测WPMY-1细胞。

• 酵母和真菌检测：显微镜观察和培养法检测WPMY-1细胞。