huh-7.5.1细胞（人肝癌细胞）

Huh-7.5.1细胞系是从一名57岁男性肝细胞癌患者的肝脏中获得的人肝癌细胞。huh-7.5.1细胞系由Huh-7细胞的亚克隆衍生而来，并经过基因改造，使其能够更有效地在体外支持丙型肝炎病毒（HCV）的复制。广泛用于其他病毒（如SARS-CoV-2）与宿主细胞相互作用的研究。

huh-7.5.1细胞特性特征

• RIG-I基因突变：huh-7.5.1细胞的RIG-I基因发生了突变，导致其对干扰素（IFN-β）的反应能力降低，从而使HCV可以在细胞中更顺利地复制和传播。
  

• 抗原表达：huh-7.5.1细胞系可能表达多种肝脏相关的抗原，如甲胎蛋白（AFP），这与肝癌的特征相关。
  

• Huh-7.5.1细胞在感染HCV后，会表现出特定的病毒相关基因表达，这对于研究病毒生命周期和抗病毒药物开发至关重要
  

huh-7.5.1细胞参数表

huh-7.5.1人肝癌细胞培养教程

Huh7.5.1细胞复苏

• 提前将水浴锅预热至37℃。
  

• 使用75%酒精消毒操作区域和工具，包括离心管、移液器、培养瓶等。

• 超净工作台需用紫外线照射至少30分钟以确保无菌操作环境。

• 从液氮罐中取出冻存的Huh7.5.1细胞管，迅速放入37℃的水浴锅中，轻轻摇动至完全融化（约1-2分钟）。
  

• 立即用酒精棉球擦拭管壁，然后转移到超净工作台内。

• 将解冻后的Huh7.5.1细胞悬液转移到15 mL离心管，300 g离心3分钟。
  

• 弃去上清，加入预温的完全培养基（DMEM+10% FBS）重悬细胞，调整细胞浓度至约5×10^5 cells/mL。

• 将Huh7.5.1细胞悬液分装入培养瓶中，放入37℃、5% CO₂培养箱内。
  

• 培养2-4小时后检查细胞状态，必要时更换培养基。

Huh7.5.1细胞传代

• 当Huh7.5.1细胞达到80%-90%的汇合度时进行传代。
  

• 准备0.25%胰蛋白酶-0.02% EDTA溶液用于细胞消化。

• 弃去旧培养基，使用不含钙、镁的PBS冲洗Huh7.5.1细胞1-2次。
  

• 加入1 mL消化液覆盖细胞层，放置于37℃培养箱中消化2-5分钟，观察Huh7.5.1细胞是否开始脱落。

• 轻轻吹打细胞，如果Huh7.5.1细胞大部分已脱离，立即终止消化。

• 加入2-3 mL完全培养基终止消化，将细胞悬液转移至无菌离心管中，1000 g离心5分钟。
  

• 弃去上清，加入新鲜培养基重悬Huh7.5.1细胞。

• 将重悬后的Huh7.5.1细胞按1:2的比例分装至新的培养瓶中，加入适量完全培养基，继续在37℃、5% CO₂条件下培养。

Huh7.5.1细胞冻存

• 使用90%完全培养基与10%DMSO混合制备冻存液。
  

• 将收集到的Huh7.5.1细胞离心，去除上清后加入冻存液制成细胞悬液。
  

• 按每管1×10^6 cells的浓度将Huh7.5.1细胞悬液分装到冻存管中。

• 将冻存管先放置于4℃预冷30分钟，再放置于-20℃ 1小时，随后置于-80℃冰箱过夜。
  

• 第二天将冻存管转移至液氮罐中长期保存。

• 对每个Huh7.5.1细胞冻存管进行编号，并记录详细信息，包括细胞数量、冻存日期等，以便后续查找和复苏。
  

注意事项

• 操作过程中严格保持无菌操作，避免交叉污染。

• 定期检查培养箱的温度、CO₂浓度等条件，确保Huh7.5.1细胞生长环境稳定。

• 复苏后的Huh7.5.1细胞需密切观察贴壁率和活力，若95%以上细胞贴壁且活性良好，表明复苏成功。