AAV-293 人胚肾细胞

AAV-293人胚肾细胞源自普遍使用的HEK-293细胞株，但AAV-293细胞产生的病毒滴度更高。AAV-293细胞反式表达腺病毒E1基因，当共转染三个AAV助质粒(一个含ITR的质粒、pAAV-RC和E1缺失助质粒)时，AAV-293细胞可以产生有感染力的腺病毒-相关病毒颗粒；推荐AAV-293细胞株繁殖腺病毒相关重组病毒。

AAV-293细胞是一种针对无辅助系统中AAV病毒颗粒包装而优化的HEK293细胞系。
AAV-293细胞和HEK293细胞一样，产生腺病毒E1基因在反式中，当细胞与三种病毒共转染时，可以产生感染性腺相关病毒颗粒AAV无辅助系统质粒（含ITR的质粒pAAV-RC和E1缺失的pHelper质粒），由感染 AAV-293 细胞制备的重组 AAV-2 病毒颗粒可用于感染多种哺乳动物细胞。

AAV-293细胞系是从用人5型腺病毒DNA转化的原代胚胎人肾建立的永久性细胞系。腺病毒E1区编码的基因（E1a和E1b）在这些细胞中表达，并参与病毒启动子的反式激活，使AAV-293细胞产生高水平的蛋白质。AAV-293来源于亲本293细胞系，通过克隆和多轮测试，AAV-293在无辅助物的系统中被专门选择用于高水平的AAV生产。与常规293细胞相比，它有几个优点：更大的细胞表面积导致更高的转染率和更好的AAV产量。
AAV-293细胞其优点是扁平的形态，牢固地附着在培养板上，细胞是大规模培养和AAV生产的理想选择。腺相关病毒（AAV）属于细小病毒科，是单链和无包膜DNA病毒中最小的一组病毒。

AAV-293人胚肾细胞特性

• HEK-293细胞经剪切过的腺病毒5型DNA转染，形成AAV-293细胞。

• AAV-293细胞反式表达腺病毒E1基因，能够与三个AAV助质粒共转染产生有感染力的腺病毒-相关病毒颗粒。

• 推荐使用AAV-293细胞株进行腺病毒相关重组病毒的生产。

• AAV-293细胞适用于AAV病毒的复制和包装，提供了所需的反式作用因子。

• AAV-293细胞在无辅助系统中表现出优化的腺病毒颗粒包装能力。

• AAV-293细胞的优势包括高病毒滴度和稳定的表达特性。

• 细胞形态为上皮细胞样，适合贴壁培养，提供了大表面积用于高产量的AAV生产。

• 细胞经过多轮测试和克隆，被专门选用用于生产重组AAV-2病毒颗粒。

AAV-293人胚肾细胞参数表

AAV-293人胚肾细胞培养

细胞传代

• 当AAV-293细胞密度达80%-90%时，即可进行传代培养。

• 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗AAV-293细胞1-2次。

• 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

• 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

• 收到AAV-293细胞后首次传代推荐将细胞悬液按1:2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或瓶中，建议冻存一支备用，后续传代根据实际情况按1:2到1:4的比例进行。

冻存步骤

• AAV-293细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

• 4分钟1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬AAV-293细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为5%，细胞密度不低于1x10^6/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。

• 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮罐储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

操作注意事项

• AAV-293细胞较喜欢成团生长，比较娇嫩，怕冷。传代时不要一次从二氧化碳培养箱拿出很多瓶，一次只要拿2-3瓶出来传就可以了，否则AAV-293细胞很容易死掉。

• 细胞在50-60%密度时传代，AAV-293细胞生长状态最好。

• 用D-Hank’s液配制成0.25%的胰酶消化半分钟左右，弃去胰酶。观察培养瓶是否有针孔样缝隙，如有就可以加入培养液吹打AAV-293细胞。消化过久，对细胞损害很大，而且成团很难吹打成单个细胞。然后加入含有10%小牛血清的DMEM轻轻放入二氧化碳培养箱中培养。