mda-mb-453细胞 (人乳腺癌细胞)

MDA-MB-453细胞株由R. Cailleau等人于1976年从一位48岁患有转移性乳腺癌的白人女性患者的胸水中分离出来，转移部位包括淋巴结、大脑、胸膜腔和心包腔。

MDA-MB-453细胞系为非整倍体的女性细胞，染色体模态数为90，范围在87至91之间。其染色体数目从亚倍体到接近四倍体不等。
MDA-MB-453细胞系中缺失了正常的N11、N13和N17染色体，而N2、N6和N12染色体的拷贝数明显不足，N20染色体则过度表达。
MDA-MB-453细胞系中存在大量一致的标记染色体，许多染色体具有多个拷贝。

MDA-MB-453细胞系的染色体模式包括22条重排的结构染色体，主要呈现四倍体状态，其中多倍体细胞占6%。

mda-mb-453细胞特性

• mda-mb-453细胞表达成纤维细胞生长因子（FGF）和FGF受体。
  

• mda-mb-453细胞呈混合形态，贴壁的上皮状细胞、单个悬浮活细胞和细胞簇。

• mda-mb-453细胞高水平表达功能性雄激素受体（AR）。
  

• mda-mb-453细胞在免疫抑制小鼠中不形成肿瘤，但在半固体培养基中形成菌落。

• 同工酶包括AK-1（1）、ES-D（1-2）、G6PD（B）、GLO-I（1）、PGM1（1）和PGM3（1）。
  

• mda-mb-453细胞不属于三阴性乳腺癌细胞，ER和PR为阴性，HER-2为阳性。
  

mda-mb-453细胞参数表

mda-mb-453人乳腺癌细胞培养教程

细胞复苏

• 将含有1mL MDA-MB-453细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面低于冻存管盖部），摇晃解冻。

• 解冻后，立即将细胞悬液移入预先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中，混合均匀。

• 在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液。

• 加入1mL新鲜培养基，轻轻吹匀细胞。

• 将所有MDA-MB-453细胞悬液移入含有5mL培养基的培养瓶中，培养过夜。

• 第二天更换培养基，并检查细胞密度。

细胞传代

• 当MDA-MB-453细胞密度达80%-90%时，进行传代培养。

• 尽量吸干净T25瓶中的旧培养基。

• 加3-4ml常温PBS轻轻润洗MDA-MB-453细胞10-20秒，然后吸走PBS。

• 在T25瓶中加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶使胰酶均匀覆盖细胞层。

• 将培养瓶放入37度培养箱中消化。

• 当MDA-MB-453细胞间隙变大但未完全脱落时，加入2-3ml完全培养基终止胰酶消化。

• 混匀细胞，900rpm离心3-5分钟，弃去上清。

• 加入新的完全培养基轻轻重悬细胞，将细胞悬液均匀分到新的培养瓶中。

• 补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱继续培养。

细胞冻存

• 消化并离心后获得MDA-MB-453细胞沉淀，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞。

• 将细胞悬液迅速移入已标记好的冻存管中。

• 将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存。

• 若没有程序冻存盒，可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10分钟，再在-20度静置2小时后转入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存。

MDA-MB-453细胞培养注意事项

• MDA-MB-453细胞使用L15培养基，不需要CO₂平衡。

• L-15培养基采用磷酸盐和游离氨基酸缓冲，适用于非CO₂环境中的细胞生长。

• 若没有无空气培养箱，可以使用不透气培养瓶（密封瓶盖）培养MDA-MB-453细胞，并将瓶盖拧紧，每次操作时开盖短时间接触到的二氧化碳不会影响正常培养。

• MDA-MB-453细胞也可以使用HD培养基在5%CO₂浓度培养箱中培养，此条件下细胞形态和倍增时间几乎没有影响。

MDA-MB-453细胞培养数据

• 形态：上皮样，圆形，单层松散附着。

• 培养基：80-90%莱博维茨L-15培养基+10-20%h.i.FBS。

• 亚培养：以2-4×10⁶个MDA-MB-453细胞/80 cm²的速度接种；使用胰蛋白酶/EDTA以1:2至1:6的比例分开融合培养；可以通过轻敲烧瓶来部分分离细胞；细胞可能需要几天才能再次粘附。

• 培养：37°C，无CO₂气体交换（无过滤盖，烧瓶盖关闭）。

• 加倍时间：约50-60小时。

• 收获：约25-35 x 10⁶个MDA-MB-453细胞/80 cm²。

• 储存：用85%培养基、10%FBS、5%DMSO冷冻。

• 支原体：用环丙沙星消除最初的污染，然后在DAPI、微生物培养、RNA杂交和PCR检测中呈阴性。