ZR-75-30细胞（人乳腺癌细胞）

ZR-75-30人乳腺癌细胞系，来源于一名47岁绝经前非裔美国女性患者（浸润性导管癌），细胞样本采集自她的恶性腹水。ZR-75-30细胞系属于恶性乳腺上皮细胞，已确认没有HeLa细胞污染。
ZR-75-30细胞系是超三倍体，染色体模式数目为80，出现在约40%的细胞中。具有较高倍性（即超过模式染色体数目）的细胞比例为1.2%。在大多数细胞中可观察到16条标记染色体。ZR-75-30细胞系的转移特性体现在其来源的恶性腹水。

ZR-75-30细胞参数表

ZR-75-30人乳腺癌细胞培养教程

收货处理

• 活细胞: 收到ZR-75-30细胞后，用75%酒精消毒瓶壁，将T25瓶放入37°C培养箱中稳定2-4小时，以使ZR-75-30细胞状态稳定。

• 冻存管: 收到ZR-75-30细胞冻存管后，需立即转入液氮冻存或直接进行复苏操作。

细胞复苏

• 从液氮中取出ZR-75-30细胞冻存管，迅速放入37°C水浴中摇动，直到完全融化。

• 用75%酒精消毒冻存管外壁，在无菌操作台内打开冻存管。

• 将ZR-75-30细胞悬液转移至含10 ml预热完全培养基的离心管中，以1000 rpm离心5分钟。

• 弃去上清，加入1 ml预热完全培养基重悬ZR-75-30细胞。

• 将细胞悬液转移至T25培养瓶中，加入适量完全培养基，置于37°C、5% CO2培养箱中培养ZR-75-30细胞。

传代培养

• 弃去培养上清，用PBS轻轻洗涤ZR-75-30细胞。

• 加入适量胰蛋白酶消化液，37°C消化1-2分钟。

• 观察ZR-75-30细胞脱落情况，加入完全培养基终止消化。

• 轻轻吹打细胞悬液，分装到新的培养瓶中，按1:2比例传代ZR-75-30细胞。

冻存细胞

• 收集对数生长期的ZR-75-30细胞，1000 rpm离心5分钟。

• 弃去上清，加入冻存介质（完全培养基 + 5-10% DMSO）重悬ZR-75-30细胞。

• 将细胞悬液分装至冻存管中，每管1-5 x 10^6细胞。

• 逐步降温至-80°C后转移至液氮中长期保存ZR-75-30细胞。

常见问题及解决方法

• ZR-75-30细胞增殖缓慢或停滞

• 原因: 培养基成分不合适、培养条件不稳定、细胞密度不适。

• 解决方法: 使用推荐培养基（RPMI-1640 + 20% FBS + 1% P/S），保持37°C、5% CO2的稳定培养条件，适时传代（ZR-75-30细胞密度达80%-90%时）。

  
  

• ZR-75-30细胞形态异常

• 原因: 培养基污染、培养条件不适、细胞老化。

• 解决方法: 定期检查培养基的pH值和污染情况，确保培养条件适当，及时传代ZR-75-30细胞。

  
  

• ZR-75-30细胞死亡率高

• 原因: 胰蛋白酶消化时间过长、培养基不合适。

• 解决方法: 控制胰蛋白酶消化时间（1-2分钟），使用新鲜培养基，并确保无菌操作。

  
  

• ZR-75-30细胞污染

• 原因: 操作不当或培养基污染。

• 解决方法: 严格无菌操作，使用经过检测的培养基和试剂，并定期进行支原体检测。

细胞纯度和身份确认

• 支原体检测
  

• 方法: 定期进行支原体检测，确保ZR-75-30细胞培养环境无支原体污染。

• 频率: 每月一次或每次传代前。

  
  

• 细胞形态学检查

• 方法: 显微镜下观察ZR-75-30细胞形态，确保无异常变化。

• 频率: 每次传代时。

  
  

• 基因表达分析

• 方法: 通过RT-PCR或Western Blot分析关键基因和蛋白质表达，确保与ZR-75-30细胞特征一致。

• 关键基因: 乳腺癌相关基因如ER、PR、HER2等。

  
  

• 染色体核型分析

• 方法: 进行染色体核型分析，确认ZR-75-30细胞的染色体数目和结构。

• 核型特征: 超三倍体，模式染色体数80，16条标记染色体。