NFS-60细胞（小鼠髓性白血病淋巴细胞）

NFS-60细胞系源自小鼠髓性白血病，通过Cas-Br-MuLV野生小鼠生态型逆转录病毒诱导产生。NFS60细胞系在形态上表现为淋巴母细胞，适合用于免疫系统疾病研究，并且是进行转染实验的理想宿主。

NFS-60细胞特性特征

• 依赖性：NFS60细胞对粒细胞集落刺激因子（G-CSF）有依赖性
  

• 反应性：NFS60细胞对白细胞介素-3（IL-3）和巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）有反应

• 基因特征：NFS60细胞含有由逆转录病毒整合引起的截短型c-myb原癌基因

NFS60细胞参数表

NFS-60小鼠髓性白血病淋巴细胞培养教程

NFS-60细胞复苏

• 从液氮中取出冻存的NFS-60细胞，迅速在37°C水浴中解冻。

• 将NFS-60细胞悬液转移到含有预热培养基的离心管中。

• 低速离心（约200g，5分钟）去除冻存保护剂。

• 弃去上清液，用新鲜培养基重悬NFS-60细胞。

• 将NFS-60细胞转移到培养瓶中，置于培养箱中培养。

日常维护

• 每2-3天更换一次培养基。

• 观察NFS-60细胞生长状态，保持NFS-60细胞密度在适当范围内。

传代

• 当NFS-60细胞密度达到约1×10^6 cells/ml时进行传代。

• 传代比例通常为1:2至1:4，根据NFS-60细胞生长情况调整。

• 收集NFS-60细胞悬液，低速离心。

• 弃去上清液，用新鲜培养基重悬NFS-60细胞。

• 将适量NFS-60细胞转移到新的培养瓶中。

细胞冻存

• 冻存液：90% FBS + 10% DMSO

• 收集对数生长期的NFS-60细胞，调整密度至约5×10^6 cells/ml。

• 缓慢加入等体积冻存液，轻轻混匀。

• 将NFS-60细胞悬液分装到冻存管中，每管1ml。

• 使用程序降温盒在-80°C冰箱中缓慢降温。

• 24小时后转移到液氮中长期保存。

NFS-60细胞的培养时间和可能遇到的问题

培养时间

• NFS-60细胞的培养时间取决于实验的具体需求和NFS-60细胞的生长速度。一般情况下，每2-3天更换一次培养基并进行传代。传代比例通常为1:2至1:4，NFS-60细胞的生长周期大约为2-3天。具体的培养时间可根据NFS-60细胞的生长状态和实验需求进行调整。

可能遇到的问题

• 污染问题

• 细菌、真菌、霉菌污染：会导致NFS-60细胞死亡或生长异常，需保持无菌操作并定期检查培养基和NFS-60细胞状态。

• 支原体污染：难以察觉，但会影响NFS-60细胞的生长和实验结果，需定期进行支原体检测。

  
  

• NFS-60细胞状态不良

• 细胞形态异常：可能由于培养条件不适或污染引起，应检查培养基成分和环境条件。

• 细胞增殖缓慢：可能由于培养基成分不足或细胞因子（如G-CSF）浓度不够，应确保培养基和添加剂的新鲜和正确比例。

  
  

• NFS-60细胞冻存和复苏问题

• 细胞冻存不当：若冻存过程中NFS-60细胞受损，会影响复苏后的NFS-60细胞活力，应确保冻存液配比正确（10% DMSO + 90% FBS）并使用程序降温盒。

• 复苏后细胞活力低：复苏过程中操作不当或冻存时间过长会影响NFS-60细胞活力，应迅速解冻并及时转移到预热的培养基中。

  
  

• NFS-60细胞依赖性问题

• G-CSF依赖性：NFS-60细胞对G-CSF有依赖性，缺乏G-CSF会导致NFS-60细胞无法正常生长，应确保培养基中G-CSF的浓度适宜（15 ng/ml）。

  
  

• NFS-60细胞传代问题

• 传代比例不当：传代比例过高或过低都会影响NFS-60细胞的生长状态，应根据NFS-60细胞密度和生长情况调整传代比例，一般为1:2至1:4。

• 传代频率不当：传代过频或过稀都会影响NFS-60细胞的健康状态，应根据NFS-60细胞生长速度每2-3天进行一次传代。