IMCD3细胞（小鼠肾脏内髓集合管3上皮细胞） （暂不提供）

IMCD3细胞系是一种源自成年小鼠肾脏内髓集合管上皮细胞的细胞系，最早于1991年由Michael Rauchman通过显微解剖技术从SV40早期区域转基因小鼠（Tg(SV40E)bri/7）分离。IMCD3细胞系经过SV40大T抗原的介导转化，具有永生化特性，广泛用于肾脏生理与病理机制的研究。

IMCD3细胞从小鼠肾脏内髓集合管末端部分获取，通过显微解剖技术分离出集合管的末端三分之一的小管，并在特定培养基中培养扩增，最终通过克隆筛选获得稳定的细胞系。IMCD3细胞具有典型的极化上皮细胞形态，保留了IMCD区域的多项功能特征。

IMCD3细胞特性特征

• 高跨上皮电阻：IMCD3细胞表现出高达1368 Ω·cm²的跨上皮电阻，表明其良好的极化状态和紧密连接功能。
  

• 钠通道特性：IMCD3细胞中存在对阿米洛利敏感的钠通道，阿米洛利和心钠素（ANP）能有效抑制从顶端到基底的钠通量，分别抑制41%和40%。

• 有机渗透调节物质积累：在高渗透环境下（如补充NaCl和尿素的培养基中），细胞能够积累主要的有机渗透调节物质，如肌醇、山梨醇、甜菜碱和甘油磷酸胆碱，这些物质帮助细胞抵御渗透压力。
  

• 适应极端渗透条件：IMCD3细胞可在高达910 mosmol/kg H₂O的高渗培养基中生长，这种条件在体内肾髓质中存在，但对大多数其他细胞是致命的。

• 内皮素分泌：IMCD3细胞能够分泌内皮素，并形成小管和紧密连接，这对肾脏功能至关重要。
  

• 钠通道：通过蛋白质印迹分析，确认IMCD3细胞具有阿米洛利敏感的钠通道，这一特性对于研究肾脏的离子转运机制非常重要。
  

• HGF反应性：IMCD3细胞对肝细胞生长因子（HGF）有反应。

• IMCD3细胞系保留了许多与内髓集合管相关的基因表达特征，适合用于研究与肾脏发育、功能及疾病相关的分子机制。
  

IMCD3细胞参数表

IMCD3小鼠肾脏内髓集合管3上皮细胞培养教程

IMCD3细胞传代步骤

• 弃去旧培养基：将IMCD3细胞培养瓶中的旧培养基弃去。

• PBS清洗：用无钙镁的PBS缓冲液清洗IMCD3细胞1-2次。

• 加入2 ml 0.25%胰蛋白酶-0.53 mM EDTA消化液，37°C消化1-2分钟，确保IMCD3细胞变圆脱落。

• 观察IMCD3细胞脱落后，立即加入含血清的培养基终止消化。

• 将IMCD3细胞悬液转移至离心管，1000 RPM离心4分钟。

• 弃去上清后，用新鲜培养基重悬IMCD3细胞，并按1:2至1:5比例接种至新培养瓶中。

IMCD3细胞冻存步骤

• 冻存液制备：使用90% FBS和10% DMSO混合制成IMCD3细胞的冻存液。

• 在IMCD3细胞处于对数生长期时进行收集，并将细胞浓度调整至5×10^6个细胞/ml。

• 离心去除上清后，用冻存液重悬IMCD3细胞。

• 将重悬的IMCD3细胞分装于冻存管中，并标记。

• 使用程序降温盒，先将冻存管置于-80°C冰箱中冷冻至少2小时，再转移至液氮罐保存。

IMCD3细胞复苏步骤

• 快速解冻：从液氮中取出IMCD3细胞冻存管，迅速放入37°C水浴中，轻轻摇晃解冻，30-60秒内完成。

• 用70%乙醇消毒冻存管外部，将IMCD3细胞悬液转移至离心管中，加入10 ml新鲜培养基。
  

• 以500-1000 RPM离心5分钟，弃去上清后，用新鲜培养基洗涤一次。

• 细胞培养：复苏后的IMCD3细胞需过夜培养，次日更换一次培养基并检查细胞状态，确保IMCD3细胞正常生长。