永生化人Ⅱ型肺泡上皮细胞专用培养基

产品百科

针对ATII细胞维持表型的培养基成分配方？

适度降低血清、提供适量但不过量的生长因子、补充激素/脂质/抗氧化成分，并避免过强的增殖信号，使细胞尽量保持立方/颗粒丰富的 ATII 特征和 SP‑C 等标志的表达。

不同培养基对永生化ATII细胞增殖和分化的影响

主要评估细胞在不同培养基下的增殖速度、扩增效率和克隆能力：
生长曲线与倍增时间
在多个时间点（如 0/24/48/72/96 h）测定细胞数或 OD（CCK‑8/MTS），绘制生长曲线并计算群体倍增时间；倍增时间越短、曲线越陡说明该培养基更促进增殖。​

细胞周期与增殖标志
流式检测细胞周期（S 期比例）、Ki67、PCNA 或 EdU 掺入率，用于定量比较不同培养基对细胞周期活跃程度的影响。​

克隆形成能力
低密度接种做克隆形成实验（贴壁或软琼脂），比较克隆形成率和克隆大小，反映长期增殖和单细胞扩增能力对培养基的敏感性。

保存复苏与传代流程对永生化ATII细胞活性影响

冻存前状态对后续活性的影响：
冻存时细胞应处于对数生长期且未过度融合（建议 60–80% 融合），此时细胞周期活跃、应激较低，复苏后存活率和增殖能力更好。
长期高代次或处于衰老/应激状态（长期高密度、酸化培养基）的细胞，即使冻存成功，复苏后也更易出现增殖变慢、表型漂移（如 ATII 标志下降、扁平化加重）。

冻存配方与冻存步骤的影响：
DMSO 浓度过低（<5>15%）本身细胞毒性明显，都会降低复苏活性。
采用约 −1 ℃/min 的降温速率（控温盒或程序降温），先至 −80 ℃，再转入液氮长期保存，可最大限度减少冰晶损伤。
长期只放在 −80 ℃会因温度波动和缓慢失水导致存活率逐渐下降；建议重要批次尽量存于液氮（气相或液相）。

复苏操作对活性和后续行为的影响：
ATII 及其永生化细胞在过低密度时更易应激、表型漂移，复苏时应保证较高的接种密度（例如 T25 至少 3–5×10⁵ 个细胞），以利于细胞间接触和存活。

传代频率与消化条件对增殖和表型的影响：
长期低密度 + 过度消化 → 易诱导去分化或出现亚群选择；
长期过度融合（持续 >100% 高密度数天）→ 促使 ATII 向扁平 ATI 样转变，SP‑C 等标志下降。
过度消化（长时间胰酶/EDTA 暴露）可损伤膜受体和细胞骨架，复种后贴壁和增殖变慢，部分 ATII 标志也会受影响。
永生化不等于“无代次效应”：随着累积代次升高，ATII 细胞仍可能出现增殖曲线改变、染色体和表型漂移，建议为关键实验建立“主工作代次范围”（例如 P5–P20），超出范围的批次只做预实验或弃用。

无血清培养基是否支持永生化人Ⅱ型肺泡细胞生长？

配制无血清培养基支持永生化人Ⅱ型肺泡上皮细胞（ATII）生长，需要以营养丰富的基础介质为基础，添加模拟血清的生长因子、激素和营养补充剂，以维持贴壁、增殖和表型稳定性。 由于永生化细胞对血清依赖较低，这种体系可减少批次变异和动物成分污染，但可能需通过预实验优化以匹配具体细胞系（如HPAEpiC-Ⅱ-SV40），因为无血清条件可能略微降低增殖速率。
无血清培养基的核心是替换血清的模块化补充剂，总量控制在基础介质的1-5%（v/v），以避免过载。