大鼠肺血管平滑肌细胞（原代PASMC细胞）

大鼠肺血管平滑肌细胞（PASMC细胞）一般从健康Wistar或SD大鼠的肺动脉及其分支中分离获得。在PASMC细胞培养初期（约3天），细胞已牢固贴壁并呈现多样化的形态，如梭形、不规则形、三角或扇形，细胞核通常为卵圆形且位于中心位置。经过约2周的培养，细胞逐渐趋于汇合，多呈现长梭形、胞质丰富、具有分支状突起，排列方式可为单层或局部重叠，细胞密度较低时形成网状结构，密度较高时则呈旋涡或栅栏状排列。传代后的细胞增殖速度明显加快，通常在4至6天内便可达到汇合状态，同时维持其独特的形态学特征。

肺血管平滑肌细胞不仅通过表面表达ICAM-1和VCAM-1参与血管壁炎症反应，而且是多种动脉性疾病的重要作用靶点。例如，其异常增生可引起肺动脉高压、先天性肺动脉狭窄及肺动脉栓塞，而其快速增殖能力也是血管疾病进展中的关键因素。近期研究表明，ICAM-1和VCAM-1在调控血管壁炎症反应及维持血管稳定性中起到重要作用。

大鼠肺血管平滑肌细胞被广泛应用于肺动脉高压及肺血管重构等疾病机制与治疗方法的研究中，如探索TGF-β1的生物学效应及低浓度紫杉醇对外胶原沉积的抑制作用。

大鼠肺血管平滑肌细胞特性特征

• 表面标志物: 表达介质如ICAM-1和VCAM-1，参与血管壁炎症反应。

• 鉴定标志物: 平滑肌肌动蛋白（α-SMA）阳性。

• 收缩型标志物: α-SMA、平滑肌肌球蛋白重链、平滑肌22α蛋白、类肌钙蛋白等。
  

• 合成型标志物: OPN、VIM等2。
  

• 基因表达调控: 受多种信号通路调控，如低氧条件下通过非编码RNA影响细胞标志基因转录。
  

• 增殖能力: 在特定条件下增殖能力增强，参与肺血管重塑。
  

• 研究应用: 在研究肺动脉高压（PAH）等疾病的机制和治疗方法方面具有重要价值。
  

大鼠肺血管平滑肌细胞参数表

原代大鼠肺血管平滑肌细胞培养教程

PASMC细胞复苏

• 将含1 mL冻存的PASMC细胞悬液置于37℃水浴中，轻轻摇晃直至PASMC细胞完全解冻。

• 迅速加入4 mL预热培养基，与PASMC细胞混合均匀，稀释冻存保护剂，确保PASMC细胞在后续操作中免受毒性影响。

• 将含PASMC细胞的混合液以1000 RPM离心4分钟，弃去上清液，从而去除冻存液残余成分，保护PASMC细胞的生物活性。

• 补加1～2 mL培养基，轻柔吹打使PASMC细胞均匀分散后，将细胞悬液转移至培养瓶或10 cm培养皿中，补充约8 mL培养基，置于37℃、5% CO₂培养箱中过夜，促进PASMC细胞贴壁生长。

PASMC细胞传代

• 当培养中的PASMC细胞覆盖率达到80%～90%时，即可进行传代操作，保证PASMC细胞处于良好生长状态。

• 弃去旧培养基后，使用不含钙镁离子的PBS对PASMC细胞进行1～2次冲洗，以清除细胞表面残留的血清和代谢产物。

• 向含PASMC细胞的培养瓶中加入1 mL 0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液，在37℃培养箱中消化1～2分钟，直至大部分PASMC细胞呈圆形并开始脱落。

• 在显微镜下观察到PASMC细胞大部分脱落后，立即取出培养瓶，轻敲瓶壁促进细胞脱离，再加入少量培养基中和消化酶，确保PASMC细胞免受过度消化损伤。

• 补加6～8 mL培养基混匀后，将悬液以1000 RPM离心4分钟，弃去上清液，集中回收PASMC细胞。

• 加入1～2 mL新培养基重悬PASMC细胞，并按照1:2比例将细胞悬液分装至新的培养容器中，继续于37℃、5% CO₂条件下培养，以维持PASMC细胞的稳定增殖。

PASMC细胞冻存

• 当PASMC细胞状态良好时，先弃去培养基，用PBS冲洗一次，确保PASMC细胞表面清洁。

• 向PASMC细胞层加入1 mL胰酶，使PASMC细胞充分脱落，随后加入1 mL含血清培养基迅速中止消化过程。

• 使用血球计数板对脱落的PASMC细胞进行计数，确保冻存时PASMC细胞浓度合适。

• 将PASMC细胞悬液以1000 RPM离心4分钟，弃去上清液，再加入1 mL血清重悬PASMC细胞，保证细胞均一分布。

• 根据计数结果，按比例将血清与DMSO混合，使最终DMSO浓度达到10%，轻柔混匀，以最大限度保护PASMC细胞在低温下免受损伤。

• 将1 mL含PASMC细胞的悬液分装入预先标识的冻存管中，确保每支冻存管均清楚标明PASMC细胞信息。

• 将装有PASMC细胞的冻存管置于程序降温盒中，在-80℃冰箱中预冻约2小时后，再转入液氮罐中长期储存，以保证PASMC细胞活性长期保持。