原代小鼠肺血管平滑肌细胞

小鼠肺血管平滑肌细胞（Mouse Pulmonary Vascular Smooth Muscle cells, mPVSMCs）是研究肺动脉高压及相关疾病的重要模型细胞，主要来源于成熟小鼠（如C57BL/6品系）的肺动脉组织，通过Ⅰ型胶原酶和木瓜蛋白酶酶解技术进行分离。

肺血管平滑肌细胞是肺动脉壁的重要组成成分，形态呈梭形、不规则形或三角形，细胞核居中，具有α-SMA等特征性标志物。原代培养3天后细胞贴壁并逐渐伸展，2周后形成单层或局部多层重叠排列，细胞密度高时可呈旋涡状或栅栏状。

小鼠肺血管平滑肌细胞具有显著的增殖与迁移能力，在肺动脉高压等病理条件下，这些特性会加速疾病的进展。小鼠肺血管平滑肌细胞在疾病机制与治疗靶点开发中具有重要价值。

原代小鼠肺血管平滑肌细胞特性特征

• 生长模式：在低密度时，细胞常交织成网状；而在高密度时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后，细胞生长迅速，通常在4-6天内即可汇合。

• 生物标志物：小鼠肺血管平滑肌细胞表面表达α-SMA（α平滑肌肌动蛋白），这是平滑肌细胞的特征性标志物。还可检测到平滑肌肌球蛋白重链、平滑肌22α蛋白等收缩型标志物。
  

• 介质表达：小鼠肺血管平滑肌细胞表面表达介质如ICAM-1和VCAM-1，这些分子参与血管壁的炎症反应，并与多种动脉疾病的发生发展密切相关。

• 基因调控：在病理状态下，例如低氧环境，小鼠肺血管平滑肌细胞可能发生表型转化，从收缩型向合成型转变。这一转变伴随着收缩型标志物（如α-SMA）表达降低，而合成型标志物（如骨桥蛋白OPN、波形蛋白VIM等）表达升高。
  

• 增殖与迁移能力：小鼠肺血管平滑肌细胞在病理条件下表现出增强的增殖和迁移能力，这与肺动脉高压等疾病的发展有关

原代小鼠肺血管平滑肌细胞参数表

原代小鼠肺血管平滑肌细胞mPVSMCs培养教程

mPVSMCs细胞复苏

• 培养基预热：将完全培养基置于37℃水浴中充分预热，以准备mPVSMCs细胞的复苏。

• 细胞解冻：从液氮罐或-80℃冰箱中迅速取出mPVSMCs细胞管，放入37℃水浴中解冻，轻轻摇晃，约1分钟完成解冻。

• 离心去除冷冻保护剂：将解冻后的mPVSMCs细胞移入15 mL离心管中，加入5 mL预热的完全培养基混匀后，以1000 rpm离心5分钟，弃去上清液。

• 细胞重悬：用2 mL预热的完全培养基轻轻重悬mPVSMCs细胞沉淀。

• 接种培养：将重悬后的mPVSMCs细胞移入T25培养瓶中，加入适量完全培养基，置于37℃、5% CO₂培养箱中培养。

• 贴壁观察：培养24小时后观察mPVSMCs细胞贴壁情况，贴壁良好的细胞为后续培养的主要对象。

mPVSMCs细胞传代

• 观察细胞状态：当mPVSMCs细胞生长至80%-90%汇合度时，即可进行传代。

• PBS冲洗：吸弃培养基，用1 mL PBS缓冲液轻轻冲洗培养瓶1次，以去除培养基残留和血清影响。

• 细胞消化：加入1 mL 0.25%胰酶，均匀覆盖mPVSMCs细胞表面，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞收缩并开始脱落。

• 终止消化：加入1 mL完全培养基终止胰酶作用，并轻轻拍打培养瓶以促进细胞脱落。

• 离心重悬：将mPVSMCs细胞悬液转移至离心管中，以1000 rpm离心5分钟，弃去上清液。用适量完全培养基重悬细胞，确保分散均匀。

• 细胞接种：按1:2或1:3比例将mPVSMCs细胞分装至新的T25培养瓶中，加入适量完全培养基，继续在37℃、5% CO₂条件下培养。

mPVSMCs细胞冻存

• 收集细胞：待mPVSMCs细胞生长至80%-90%汇合时，按上述传代方法消化并收集细胞沉淀。取少量细胞计数后调整密度至1×10⁶个/mL。

• 制备冻存液：用预冷的冻存液重悬mPVSMCs细胞沉淀，确保细胞分散均匀。

• 分装冻存管：将重悬的mPVSMCs细胞溶液分装至冻存管，每管约1 mL。

• 程序冻存：将冻存管置于程序冻存盒中，先放入-80℃冰箱冷冻过夜，随后转移至液氮罐中长期保存。

注意事项

• mPVSMCs细胞的解冻与冻存需快速操作，以避免温度波动对细胞活性的影响。

• 消化时间需严格控制，避免胰酶过度消化导致mPVSMCs细胞损伤。

• 培养过程中应定期观察mPVSMCs细胞形态，确保细胞状态良好且无污染迹象。

• 冻存液中的DMSO需质量可靠，并确保在冻存前充分预冷。