大鼠肝动脉平滑肌细胞（原代细胞）

大鼠肝动脉平滑肌细胞（Rat Hepatic Artery Smooth Muscle Cells, RHASMCs）来源于大鼠肝脏的肝动脉组织，是血管壁的重要组成部分，在维持血管结构稳定性及调控血管收缩功能中发挥关键作用。

RHASMC细胞的生长和功能受多种因子调控，特别是在血管疾病的发生发展过程中起着重要作用。血管平滑肌细胞高表达的ICAM-1和VCAM-1与血管炎症反应及病变进展密切相关，RHASMC细胞广泛应用于血管生理、病理机制研究及药物筛选等领域。

大鼠肝动脉平滑肌细胞特性特征

• 细胞形态：呈长梭形，无横纹，圆形核位于细胞中央，收缩时核可扭曲呈螺旋形。

• 胞浆特征：胞浆丰富致密。

• 贴壁生长型：细胞密集时呈典型的“峰-谷”状生长。

• 可传代次数：可传3-5代。

• 表达蛋白：表达平滑肌肌动蛋白（α-SMA）。

• 炎症相关分子：可能表达ICAM-1和VCAM-1，参与血管壁的炎症反应。

• 免疫荧光标记：α-SMA阳性。

• 炎症反应：参与血管壁的炎症反应，并与血管疾病的进展和稳定有关。

• 收缩功能：作为平滑肌细胞，负责血管的收缩和舒张，影响血流调节。

• 生理作用：在机体的正常生理过程中发挥重要作用，尤其是在血管调节方面。

大鼠肝动脉平滑肌细胞参数表

原代大鼠肝动脉平滑肌细胞培养教程

RHASMC细胞复苏

• 准备工作：提前预热37℃水浴，准备含10%小牛血清（FBS）的完全培养基（DMEM），并确保无菌环境。

• 解冻RHASMC细胞：从液氮罐中取出冻存管，拧松管盖1/4圈静置10秒后重新拧紧。将冻存管的下半部分浸入37℃水浴中，轻轻摇晃至细胞完全解冻（约1-2分钟）。

• 去除冷冻保护剂：迅速将细胞悬液转入无菌离心管中，加入4ml预热培养基，1000rpm离心4分钟，弃去上清。

• 细胞重悬与培养：用1-2ml预热培养基轻轻吹打RHASMC细胞，使其均匀分散后转移至培养瓶，补足培养基至合适体积（如5-10ml）。置于37℃、5% CO₂孵箱中静置培养过夜，次日换液去除未贴壁细胞。

RHASMC细胞传代

• 细胞状态检查：当RHASMC细胞生长至80%-90%汇合时进行传代。

• PBS洗涤：弃去培养液，用不含钙镁离子的PBS洗涤RHASMC细胞1-2次。

• 消化细胞：加入1ml 0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，37℃孵育1-2分钟。显微镜下观察，当细胞变圆、开始脱落时，立即终止消化。

• 终止消化与收集细胞：加入含血清培养基终止消化，轻轻吹打使RHASMC细胞悬浮。400g离心5分钟，弃去上清后补加新鲜培养基重悬。

• 接种与培养：按照1:2-1:3的比例分装至新培养瓶，补足培养基，继续37℃、5% CO₂培养。

RHASMC细胞冻存

• 制备冻存液：使用50%完全培养基 + 40%小牛血清 + 10% DMSO，预冷至4℃备用。

• 收集细胞：RHASMC细胞消化后，离心去除胰蛋白酶，上清液弃去后用冻存液重悬细胞，调整浓度至0.5×10⁶ - 1×10⁶ 细胞/ml。

• 冻存步骤：将RHASMC细胞悬液分装入冻存管，置于程序降温盒（-1℃/min降温速率）中，放入-80℃冰箱预冻16-18小时后转入液氮长期保存。

RHASMC细胞培养条件与注意事项

• 换液频率：每2-3天换液一次，保持RHASMC细胞状态稳定。
  

• 细胞形态：初代培养RHASMC细胞呈多种形态（梭形、三角形、扇形等），传代后趋于长梭形，并以单层或局部重叠方式生长。

• 鉴定方法：可通过α-SMA免疫荧光标记检测RHASMC细胞纯度，通常可达90%以上。