
MOVAS细胞(小鼠主动脉血管平滑肌细胞)
- 来源:心;主动脉;平滑肌
- 细胞特征:贴壁细胞 , 上皮细胞样
- 培养基:DMEM+10% FBS+1% P/S
- 其他:基因表达:肌动蛋白、平滑肌α-肌动蛋白、Calponin 1(基础型)、德斯敏、平滑肌蛋白22。
MOVAS细胞(小鼠主动脉血管平滑肌细胞)是一种纺锤形细胞系,于1999年首次从成年小鼠的主动脉平滑肌中分离。通过胶原酶和弹性蛋白酶的消化处理,分离得到的原代血管平滑肌细胞,然后用编码SV40大T抗原和新霉素抗性基因的逆转录病毒进行转染。转染后的细胞在含有0.4 mg/ml G418的培养基中进行克隆选择,并通过限制稀释法获得亚克隆。MOVAS细胞系广泛应用于心血管疾病研究。
MOVAS细胞特性特征
基因表达:肌动蛋白,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Calponin 1、德斯敏(Desmin)、平滑肌蛋白22
遗传特征:含有SV40大T抗原基因、携带新霉素抗性基因
α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫荧光染色呈阳性、细胞纯度高于90%
永生化特征:通过SV40大T抗原转化实现永生化
MOVAS细胞参数表
细胞名称 | MOVAS细胞(小鼠主动脉血管平滑肌细胞) |
细胞别称 | MOVAS-1; Movas-1; Movas |
来源 | 主动脉;SV40转化;平滑肌;C57BL/6 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
细胞类型 | 正常细胞 |
生长特性 | 贴壁细胞 |
收录 | ATCC |
生物安全等级 | 2 |
致瘤性 | 无 |
永生化方法 | SV40大T抗原转化 |
细胞鉴定 | α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫荧光染色阳性,细胞纯度高于90% |
基因表达 | 肌动蛋白,平滑肌α-肌动蛋白;Calponin 1,Desmin,平滑肌蛋白22 |
培养基 | DMEM + 10% FBS + 1% P/S + 0.2 mg/mL G418 |
培养环境 | 37℃;5% CO2;饱和湿度 |
换液周期 | 2-3天 |
培养基体积 | T25瓶:10-12 mL;10 cm皿:12-15 mL |
传代比例 | 1:2 - 1:4(视细胞生长速度及密度决定) |
冻存液配方 | 92% FBS + 8% DMSO(新手推荐);或92%完全培养基 + 8% DMSO(高手推荐) |
冻存规格 | 200-300万细胞/mL,每管1 mL |
适用领域 | 3D细胞培养、心血管疾病研究、基础生物学研究 |
培养教程
MOVAS小鼠主动脉血管平滑肌细胞培养教程
MOVAS细胞的传代步骤
吸干MOVAS细胞的原培养基。
使用3-4 mL常温PBS轻轻润洗MOVAS细胞,持续10-20秒,然后吸走润洗的PBS。
加入1 mL胰酶,轻轻晃动培养瓶使胰酶均匀覆盖MOVAS细胞层。
将培养瓶放入37℃培养箱中消化,观察MOVAS细胞间隙的变化。
当MOVAS细胞间隙增大但未完全脱落时,加入2-3 mL完全培养基以终止消化。
混匀MOVAS细胞后,以900 RPM离心3-5分钟,弃去上清液。
加入新的完全培养基轻轻重悬MOVAS细胞,均匀分配到新培养瓶中。
补足完全培养基,放回培养箱静置培养MOVAS细胞。
MOVAS细胞培养的注意事项
不同品牌的胰酶消化时间可能有所不同,需根据MOVAS细胞状态严格控制消化时间。
消化传代MOVAS细胞时,吹打细胞要轻柔,避免产生过多气泡。
MOVAS细胞的冻存步骤
冻存规格:每管冻存200-300万MOVAS细胞/mL,体积为1 mL。
消化并离心获得MOVAS细胞沉淀后,加入冻存液轻轻重悬MOVAS细胞。
将MOVAS细胞悬液移入标记好的冻存管。
转入程序冻存盒,放入-80℃冰箱过夜,第二天转入液氮保存MOVAS细胞。
MOVAS细胞的复苏步骤
解冻:将MOVAS细胞冻存管在37℃水浴中迅速解冻。
混合:加入5 mL培养基,轻轻混合均匀MOVAS细胞。
离心:以1000 RPM离心5分钟,弃去上清液。
补加培养基:补加4-6 mL完全培养基。
MOVAS细胞的培养基配方对其影响
培养基配方对MOVAS细胞的增殖速度和基因表达有显著影响。标准配方通常包括DMEM + 10% FBS + 1% P/S + 0.2 mg/mL G418。这个配方中的胎牛血清提供生长因子和营养物质,直接影响MOVAS细胞增殖速度。G418作为选择性抗生素,维持MOVAS细胞的遗传稳定性。调整培养基配方可能影响MOVAS细胞的生长状态和基因表达,特别是对平滑肌α-肌动蛋白、Calponin 1、德斯敏和平滑肌蛋白22等标志性基因的表达水平。因此,在进行基因表达相关研究时,需要保持培养条件的一致性,并考虑培养基配方可能带来的影响。
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